[发明专利]一种白接骨的组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组培快速繁殖技术领域，具体涉及白接骨的组培快速繁殖方法。

背景技术

白接骨[Asystasiellaneesiana(Wall.) Lindau]为爵床科（Acanthaceae）白接骨属多年生草本植物，分布于江苏、浙江、安徽、江西、福建、广东、广西、湖南（芷江、大庸、永顺、宜章）、湖北、云南、贵州、重庆、四川等地，生林下或溪边。全草入药，名白接骨、玉龙盘、无骨苎麻、玉梗半枝莲、玉接骨、血见愁、玉钱草、麒麟草、玉连环、接骨草、猢狲节根、金不换、橡皮草、华可西达、小阿西达、蛀木虫等。夏、秋季采收，晒干或鲜用。性凉，味苦、淡，入肺经。具化瘀止血、续筋接骨、利尿消肿、清热解毒之功效，主治吐血、便血、外伤出血、跌打瘀肿、扭伤骨折、风湿肢肿、腹水、疮疡溃烂、疖肿、咽喉肿痛等症。其花可仅观赏用。在中国，该属仅白接骨[Asystasiellaneesiana(Wall.) Lindau]一个种。白接骨的自然繁殖主要靠种子和根状茎，其中每个果实仅含4粒种子，靠自然繁殖显然不能达到大量繁殖的目的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种白接骨的组织培养快速繁殖方法。

为实现本发明之目的，采用以下技术方案予以实现：一种白接骨的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

①丛生芽的诱导：3月取材的外植体在添加了6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.15 mg/L 的的MS基本培养基培养到芽长3 cm时取出，沿着茎切将两侧腋芽分开，然后转移接种于第一MS基本培养基，置于培养室光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30.1-40 μmol/(m²·s)；

所述的第一MS基本培养基添加了：

6-BA 0.1-3.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L、

6-BA 0.1-3.0 mg/L+IAA 0.1-3.0 mg/L、

6-BA 0.1-3.0 mg/L +TDZ 0.1-2.0 mg/L、

6-BA 0.1-3.0 mg/L +ZT 0.1-2.0 mg/L、

ZT 0.1-2.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L、

ZT 0.1-2.0 mg/L+IAA 0.1-3.0 mg/L或

TDZ 0.1-2.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L；

②不定芽的增殖生长：将上步诱导产生的丛生芽切成2-3个一组，转接于第二MS基本培养基，置于培养室光照培养；

所述的第二MS基本培养基添加了：

6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+NAA 0.1-1.0mg/L、

6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IBA 0.1-1.0 mg/L或

6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IAA0.1-3.0 mg/L；

③不定芽的生根培养：将上步增殖培养获得的不定芽丛切成单个不定芽，转接到添加了NAA 0.1-1.0 mg/L、IAA 0.1-3.0 mg/L或IBA 0.1-1.0 mg/L的1/4强度的MS基本培养基中；

④再生苗的炼苗和移栽：将上步完成生根培养的不定芽的培养瓶打开一条缝，让其与外部空气相通，6 h后半开瓶盖，加入少量无菌水以保持培养基的湿润，过1d后完全打开瓶盖，让它完全接受培养室的日光灯管的直接光照2d后将培养基捣碎，小心取出带少量琼脂的再生苗植株，在缓慢流水中用软刷仔细清洗根部沾有的琼脂块，将清洗干净的再生苗植株移栽至添加蛭石的消毒土中，在培养容器上罩以聚乙烯塑料薄膜以保持培养容器的湿度，培养容器置于阴凉地，5天即可揭开塑料蒲膜，于阴凉处培养7d后移至大田。

作为优选方案：所述的第一MS基本培养基添加了6-BA 0-3.0 mg/L +ZT 0-2.0 mg/L。

作为优选方案：所述的第二MS基本培养基添加了：6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L、6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IAA 1.5 mg/L或6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L。