[发明专利]一种检测阿司匹林疗效的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种检测阿司匹林疗效的试剂盒及其检测方法。

背景技术

阿司匹林可以抑制血栓素A2 (TXA2)的生成，被广泛应用于防治心血管疾病。阿司匹林抵抗通常是指阿司匹林治疗未能达到预期的生物学效应（如抑制血小板聚集，抑制血栓素的生物合成，使出血时间延长）或未能预防动脉硬化血栓事件的现象。阿司匹林抵抗的及时检测，对提高心脑血管疾病患者的疗效至关重要。

张利伟等发表在《诊断学理论与实践》上的题为“阿司匹林抵抗及其实验监测”的论文对阿司匹林抵抗及其相应的检测方法进行了介绍。中国专利申请201410473417.X公开了一种试剂盒，通过肌酸激酶抗原抗体反应进行阿司匹林和氯吡咯雷药物双重抵抗的检测，该专利申请中也披露了用于检测阿司匹林抵抗的光学法血小板聚集试验法，血小板功能分析法，全学法PAGT法及其相应的优缺点。

11去氢血栓烷B2（11-dh-TXB2）是TXA2稳定的降解产物，通过检测11-dh-TXB2可以反映体内TXA2的活性，阿司匹林有效者的尿11-dh-TXB2明显下降。目前，11-dh-TXB2检测法已成为检测阿司匹林抵抗的常用方法，已有11-dh-TXB2检测试剂盒上市。然而，现有的11-dh-TXB2检测试剂盒容易产生假阴性，从而难以准确检测阿司匹林的疗效，进而耽误患者的有效治疗。

发明内容

为解决现有技术中存在的11-dh-TXB2检测试剂盒容易产生假阴性的问题，发明人对检测试剂盒和检测样品进行了大量的试验分析，预料不到地发现：尿液样品的保存，通常情况下需加入防腐剂（如0.01%的NaN3），而NaN₃会抑制辣根过氧化物酶（HRP）的活性，干扰了阿司匹林疗效的检测，现有的检测试剂盒无法准确检测含NaN3的样品，从而得出假阴性的检测分析结果。对此，本发明提供一种检测阿司匹林疗效的试剂盒，该试剂盒包含去干扰剂，可有效避免检测样品中NaN₃的干扰，及时发现阿司匹林抵抗，减少了假阴性的产生，提高了阿司匹林疗效检测的灵敏度和准确性。

本发明提供一种检测阿司匹林疗效的试剂盒，包括11-去氢血栓素B2抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶标记的11-去氢血栓素B2抗体、11-去氢血栓素B2标准溶液、底物显色液和去干扰剂。

采用上述技术方案的检测阿司匹林疗效的试剂盒，可有效避免检测样品中NaN₃的干扰，及时发现阿司匹林抵抗，减少了假阴性的产生，提高了阿司匹林疗效检测的灵敏度和准确性。

本发明提供的检测阿司匹林疗效的试剂盒检测原理是：对待测样品进行去干扰处理，采用双抗体夹心法测定样品溶液中的11-dh-TXB2水平。用人11-dh-TXB2单克隆抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入11-去氢血栓素B2标准溶液或样品溶液，再加入HRP标记的11-dh-TXB2抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色；TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品溶液中的11-dh-TXB2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），以标准品浓度（pg/mL)的半对数为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线，通过标准曲线计算样品溶液的11-dh-TXB2浓度。待测样品为血清样品或尿液样品。

优选地，所述去干扰剂选自0.1%~0.5%质量百分比的胰蛋白酶稀释液。胰蛋白酶稀释液是由胰蛋白酶用0.9%的生理盐水稀释而得。胰蛋白酶稀释液的最佳浓度是0.1%~0.5%，如果浓度小于0.1%或大于0.5%，则去干扰效果不好。每10mL尿液样品加100~200μL 0.1%~0.5%的胰蛋白酶稀释液。

优选地，所述底物显色液选自四甲基联苯胺。

优选地，所述11-去氢血栓素B2抗体选自11-去氢血栓素B2单克隆抗体或11-去氢血栓素B2多克隆抗体。