[发明专利]一种克伦特罗检测工作液及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，涉及一种克伦特罗检测工作液及检测方法。

背景技术

克伦特罗是β-受体激动剂的一种,用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。大剂量用在饲料中能促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、改善肉质和提高饲料转化率，因此又叫“瘦肉精”。

然而，克伦特罗使用后会在畜禽组织中形成残留，尤其是在猪的肝脏等内脏器官残留较高，食用后进入人体会引起心血管和中枢神经系统的毒副作用，直接危害人体健康，因此，中国农业部早在1997年发文禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用。2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，农业部分别下发文件禁止食品动物禁止使用β激动剂类药物作为饲料添加剂(农业部176号、193号公告、1519号条例)。

由于“瘦肉精”能带来更多经济价值，长期以来作为非法添加药物在畜牧生产中被大量使用。中国最早报道的瘦肉精中毒事件是1998年供港活猪引起的，此后这类事件经常发生，2009年4月27日，《联合早报》报道：中国产牛肉产品(牛肉油、牛肉汤)再被韩国查出含盐酸克伦特罗。2011年震惊全国的河南双汇“3.15”“瘦肉精”事件，更是把“瘦肉精”残留推上了风口浪尖。“瘦肉精”残留事件已成为我国养殖业和肉食品安全领域的毒瘤，严重阻碍了我国畜牧业的发展和食品安全体系建立。

目前检测克伦特罗的方法主要分为两大类:仪器分析方法和免疫分析方法。仪器分析方法主要包括气相色谱质谱联用法(GC-MS，GC-MS/MS)，高效液相色谱法(HPLC)，高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS，HPLC-MS/MS)，毛细管电泳法(CE)等。免疫分析方法主要包括酶联免疫法(ELISA)，放射免疫分析法(IA)胶体金免疫亲和层析法(GICA)等。然而由于食品样品的复杂性和样品数量巨大，现有的分析方法已不能满足β-受体激动剂快速高通量筛查的需要。因此需要建立一种快速、简单、灵敏、低成本的方法检测食品中的克伦特罗；农业部235号公告规定中对克伦特罗的要求为在所有食品动物所有可食组织中不得检出。

发明内容

本发明针对现有技术中的缺陷和不足，提供了一种克伦特罗检测的新思路，解决了现有的检测手段不能快速、多种类检测样品且检测过程费时费力的问题。

为解决上述问题，本发明采取的技术方案为：

一种克伦特罗检测工作液，该工作液为纳米金胶体和三聚氰胺溶液混合后得到的胶体溶液，其中：所述的纳米金胶体的胶体粒径小于8nm；所述的三聚氰胺溶液的浓度为4～6μM。

具体的，所述的纳米金胶体和三聚氰胺溶液的体积比为7～11:1。

一种克伦特罗检测方法，将所述的克伦特罗检测工作液与克伦特罗标准溶液、双氧水和TMB进行显色反应得到标准比色液；

待测样品溶液与权利要求1或2所述的克伦特罗检测工作液、双氧水和TMB进行显色反应得到待测样品显色液；

将待测样品显色液与标准比色液进行比对得到科伦特罗含量检测范围值。

具体的，所述的克伦特罗检测工作液与克伦特罗标准溶液的体积比为4.9～3.8:1，克伦特罗标准溶液的浓度为0μM、5μM、10μM、20μM、30μM和50μM。

更具体的，所述的待测样品溶液包括尿液样品稀释液和生物体组织样品提取液。

进一步的，该检测方法还包括通过吸光光度法对标准比色液进行的吸光度测定得到吸光度与科伦特罗浓度标准曲线，再通过吸光光度法进行待测样品显色液的吸光度测定得到科伦特罗浓度值。

本发明的有益效果为：

(1)本发明将克伦特罗与三聚氰胺协同诱导纳米金的聚集作用及纳米金模拟酶的催化活性相结合，可检测样品中的克伦特罗，为以后的研究、生产和监管等提供了必要的支持；

(2)同时本发明通过一系列的研究发现8nm以下的纳米金胶体与三聚氰胺混合后作为检测工作液与不同浓度的克伦特罗混合后，催化TMB和双氧水显色得到显示不同颜色的溶液，不仅能进行尿液样品中克伦特罗的检测，还能进行动物组织样品中克伦特罗的检测，扩大了克伦特罗能检样品的种类；

(3)另外，本发明制备的检测工作液能在4℃下保存7天，可以随取随用，与待检样品混合再加入TMB和双氧水显色后即可进行检测，与现有的先将三聚氰胺和不同浓度的克伦特罗混合再加入纳米金后显示不同的颜色相比减少了因吸取微量液体这种操作引起的误差，同时操作过程比较方便，减少了一次吸取液体的操作。

附图说明