[发明专利]ZFP36前列腺癌预后诊断的检测试剂及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体来说涉及的是一种用于前列腺癌预后诊断的检测试剂，同时还涉及该用于前列腺癌预后诊断的检测试剂盒。

 背景技术

前列腺癌是全球男性生殖系统最常见的恶性肿瘤疾病，对老年男性而言，其发病率在所有恶性肿瘤中居第二位。不同国家的前列腺癌的发病率存在较大差异。美国的前列腺癌发病率已经超越肺癌，成为发病率最高的男性恶性肿瘤。而我国的前列腺癌发病率虽然远低于欧美国家，但近年来呈明显的上升趋势。

当前的临床诊断中主要以前列腺特异抗原（PSA）对前列腺癌和前列腺增生进行鉴别，依据格利森（Gleason）评分来进行前列腺癌病理分级。然而，作为前列腺癌的诊断指标，尽管PSA的敏感性较强，但其特异性不足，研究显示前列腺增生、前列腺炎、急性尿潴留等多种疾病均可引起血浆中PSA增多。因此，开发敏感性高、特异性强、结果稳定的肿瘤标记物是前列腺癌的诊断工作的重点研究方向。

核转录因子（NF-κB）是免疫和炎症过程重要的调节因子，同时也是重要的肿瘤启动子。早期肿瘤组织中存在炎症微环境，同时与肿瘤相互作用的巨噬细胞可使NF-κB失活。NF-κB 可通过诱导IL-6、IL-1和TNF-a的表达而作用于免疫系统，进而提高肿瘤细胞生存能力并促进其增殖。

 ZFP36是真核生物基因组中最丰富的一类转录因子，具有广泛的生物学功能：如DNA识别、RNA包装、转录及转录后调控、蛋白折叠和装配及脂质结合，并参与肿瘤的形成和机体免疫干预等。最早在1989年被发现时将其描述为由瞬时早期反应基因—ZFP36基因编码的转录调控因子。ZFP36通过NF-κB/p65 介导的两个途径参与炎症应答的调节：1) 降解细胞因子 mRNA：虽然其本身无酶活性，但可通过 N 末端和 C 末端来降解多种细胞因子的 mRNA，此过程通过控制NF-κB/p65 相关基因亚型的选择及转录起始来进行，并可作为负反馈调节器参与NF-κB/p65相关的病理生理学过程，2) 阻滞NF-κB/p65细胞核移位，参与转录后调节.

研究显示ZFP36 的含量在多种肿瘤组织中出现明显下降，其原因可能是在肿瘤形成过程中，炎症细胞促进肿瘤生长，产生有利于肿瘤生长的微环境，诱发基因突变，促进血管生成。在肿瘤微环境中，炎症细胞、炎症趋化因子、细胞因子调节肿瘤生长、转移和分化，这种调节作用决定着肿瘤的发展方向。因此，研究肿瘤细胞差异的炎症反应调节机制，有望对前列腺癌预后诊断提供新的辅助诊断标记物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能检测肿瘤炎症状态，用于前列腺癌预后诊断的检测试剂。

另一目的在于提供包含该用于前列腺癌预后诊断的检测试剂的试剂盒。

本发明的用于前列腺癌预后诊断的检测试剂，其试剂组成如下(20人份)：

        H₂O₂                               1-1.5ml

       非免疫羊血清工作液                 1-1.5ml

一抗：兔源抗ZFP36多克隆抗体             2.5-20ul

二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG 工作液       1ml

链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液              1ml

DAB显色剂                                 2-3ml

本发明的用于前列腺癌预后诊断的检测试剂盒，包含检测肿瘤炎症状态的检测试剂。

本试剂盒使用方法如下：

(1) 将经拷片脱蜡、水化和抗原修复后的切片置于孵育盒中，用阻水笔把组织圈住，以免滴加后的试剂扩散，吸水纸将切片上的水稍吸去，不要碰到组织，加H₂O₂ 50ul覆盖组织后室温孵育30min，以阻断内源性过氧化物酶的活性；

(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗3min，重复 3次；

(3) 吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul非免疫羊血清工作液，室温下孵育15分钟；

(4) 轻轻甩去血清，不漂洗，滴加50ul一抗（2mg/ml兔源抗ZFP36多克隆抗体）（ZFP36抗体:PBS =1:100），室温下孵育60分钟或4℃过夜；

(5) PBS冲洗5min， 重复3次；