[发明专利]密码子优化的严重发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白基因及其核酸疫苗

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及密码子优化及携带tPA信号肽的严重发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白基因序列及其核酸疫苗。

背景技术

严重发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV)是一种最近在我国首先发现的属于布尼亚病毒科白蛉病毒属的新的病毒，临床上可引起严重发热伴血小板减少综合征(Severe fever with thrombocytopenia syndrome，SFTS)。到目前为止，在湖北、河南、江苏、辽宁、山东、安徽等多个省份均有该病例报道。严重发热伴血小板减少综合征临床表现以发热、血小板减少、白细胞减少为主，不易与其他发热和出血性疾病相鉴别，病死率可高达30％，且已有多篇关于SFTSV人-人传播、聚集性发病的文献报道。因此，进一步研究该病毒致病机制并寻找合适的诊断用抗体、中和保护性抗体已经迫在眉睫。

现有研究揭示SFTSV的基因组由大、中、小3个单股负链RNA片段组成。其中，小片段含两个方向相反的读码框，分别编码核蛋白(NP)和非结构蛋白(NSs)。当前的研究结果显示，一方面，该病毒入侵机体后能诱发宿主强烈的细胞因子风暴，且与疾病的严重程度相关；另外一方面，中国疾病预防与控制中心等研究发现SFTS患者血清中的抗体主要针对的是核蛋白，由此推测核蛋白暴露于病毒表面且其量丰富、免疫原性强，介导免疫损伤。基于此，我们以核蛋白为靶抗原，构建其重组质粒进行核酸免疫，初步观察核蛋白的免疫原性及体液免疫应答特点。

核酸疫苗(nucleic vaccine)，又名基因疫苗(gene vaccine)或DNA疫苗(DNA vaccine)，其本质是含有抗原基因的真核表达载体被导入动物机体后为动物细胞所摄取并表达相应的抗原蛋白，从而诱导机体对该蛋白的免疫反应。它具有如下优点：能够充分模拟自然感染状态，在真核细胞内合成具有相应空间构象的蛋白，不仅可以激发机体产生体液免疫反应还能够诱导产生特异性CD8+细胞毒性淋巴细胞(CTL)的免疫反应；与重组的病毒活载体疫苗除了表达目的基因外还有其自身的许多蛋白要表达相比，核酸疫苗只有载体上的抗原基因在细胞内得到表达，载体本身没有免疫原性，不会刺激机体产生抗体，能更好的保证抗原蛋白的纯度；核酸疫苗能够避免直接接触危险性较高的病原体，并且可在DNA水平对密码子进行优化、修饰，使其能够更高效地表达、更有效地刺激机体的免疫系统；而且核酸疫苗成本低廉，稳定性好，适于大规模生产、运输、保存等。但核酸疫苗也存在着诸多缺点，其中最主要的是核酸疫苗研究和应用的对象主要为真核生物，而目的基因绝大多数来自于病毒或细菌等原核生物，而原核生物与真核生物在密码子使用偏好上存在明显差异，这就导致了核酸疫苗的外源基因在真核细胞内不能高效地表达，不能有效地刺激机体的免疫系统产生应答。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺陷，提供一种密码子优化的SFTSV核蛋白基因序列。

本发明的另一目的是提供一种在优化基础上携带tPA信号肽的SFTSV核蛋白核酸疫苗。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种密码子优化的SFTSV核蛋白基因序列，序列为SEQ ID NO.2。原始SFTSV核蛋白基因序列，序列为SEQ ID NO.1。

SEQ ID NO.2所示的密码子优化的严重发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白基因序列在制备预防或治疗严重发热伴血小板减少综合征的药物中的应用。

一种SFTSV核蛋白核酸疫苗，由SEQ ID NO.2所示的SFTSV核蛋白基因序列插入到真核表达载体所得。

其中，所述的真核表达载体为真核表达载体为pJW4303。

其特征在于所述的SFTSV核蛋白核酸疫苗优选将SEQ ID NO.2所示的SFTSV核蛋白基因序列插入到真核表达载体pJW4303的HindⅢ和BamHⅠ酶切位点之间所得。

所述的SFTSV核蛋白核酸疫苗优选将SEQ ID NO.2所示的SFTSV核蛋白基因序列插入到真核表达载体pJW4303的NheⅠ和BamHⅠ酶切位点之间所得，其5’端连接tPA信号肽序列。

本发明提供的密码子优化的SFTSV核蛋白基因序列及其核酸疫苗的构建步骤如下：

(1)原始序列的SFTSV核蛋白基因序列核酸疫苗的构建