[发明专利]一种培制蛹虫草菌丝体和纤溶酶的方法

说明书

技术领域

本发明涉及共同培制一种蛹虫草菌丝体和纤溶酶的方法，属于食品科学技术领域。

背景技术

生物溶栓法目前是治疗和预防血栓性疾病的主要手段，研制高效、快速、防止再栓塞并能降低出血等不良反应的新型溶栓药物是现代医学的迫切需要。蛹虫草是一种珍贵的中药和高级滋补品，能够提高免疫功能，具有护肝清肺、止咳化痰、抗疲劳、抗缺氧、抗病毒等功效。近十余年的时间里，本申请人一直在探讨蛹虫草在现代生物溶栓剂制备中的应用潜力，并于 2008年成功地筛选到了一株具有优良溶栓性能的蛹虫草菌株C.LSG-1，该菌株已由本申请人于2008年7月4日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提供了菌种保藏，保藏号为CGMCC N_O.2577，其分类学命名为Cordyceps militaris。利用该菌株本申请人培制出了两种具有良好溶栓性能的纤溶酶，并于2008年11月12日和2010年6月4日向国家知识产权局提交了申请号为200810137564.4和201010204473.5的发明专利申请。以上两项发明均是采用液体发酵的方式制备纤溶酶一种产物，且经过色谱技术对纤溶酶进行了分离纯化，生产成本相对较高，发明人期望将其用于新型溶栓药物开发。蛹虫草的生理功效是众所周知的，野生虫草资源匮乏，虽然已经实现人工栽培，但是生产周期长，菌种子实体的形成对生长环境要求较高，占地广，导致成本高，产值低。本申请人多年来一直渴望获得一种成本低廉、安全易得、可同时生产蛹虫草菌丝体和溶栓酶且无需提取纤溶酶的方法，将其用于保健食品的研发，本发明内容就是基于这个目的进行的研究。

发明内容

本发明的发明目的在于提供一种固体发酵同时生产蛹虫草菌丝体和纤溶酶的方法。采用本发明既可得到较高纤溶活性的纤溶酶又可得到蛹虫草菌丝体，且生产方法具有操作简单，成本低，生产周期短和易于实现的优点。本发明为防治血栓栓塞症的保健食品的研发提供了新的思路和研究基础，为蛹虫草菌丝体的生产提供了一种新的途径。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是提供一种同时生产蛹虫草菌丝体和纤溶酶的方法，所述蛹虫草为蛹虫草(Cordyceps militaris)C.LSG-1，已由申请人于2008年7月4日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提供了菌种保藏，保藏号为CGMCC N_O.2577，其分类学命名为蛹虫草Cordyceps militaris。

本发明使用大米和麸皮为培养基固体培养蛹虫草菌株C.LSG-1，能够同时生产蛹虫草菌丝体和具有纤溶活力的纤溶酶。本发明中固体培养物含纤溶酶活性可达927.77U/g。

本发明是以保藏号为CGMCC NO.2577，其分类学命名为Cordyceps militaris的蛹虫草菌株C.LSG-1为菌种，依次经过斜面培养基活化、平板培养、液体种子培养、固体发酵培养，最后培制出本发明的产品。包括以下具体步骤：

1、斜面培养

将保存的蛹虫草菌株C.LSG-1接入斜面培养基，斜面培养基组成包括20%马铃薯汁、2.5%琼脂、1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.1%磷酸二氢钾、0.05%硫酸镁、pH自然，在23℃培养15~20d获得斜面培养物。

、平板培养

将斜面培养基培养的蛹虫草菌株C.LSG-1接入平板培养基，平板培养基组成包括20%马铃薯汁、2.5%琼脂、1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.1%磷酸二氢钾、0.05%硫酸镁、pH自然，在23℃培养15~20d获得平板培养物。

、液体种子培养

液体种子培养基组分包括20%马铃薯汁、1～2%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.1%磷酸二氢钾、0.05%硫酸镁、pH自然。

挑选菌丝洁白、生长健壮、浓密、无污染的蛹虫草平板培养物作为菌种。在无菌条件下，用打孔器在平板上打直接约为10mm的菌片，将菌片接入到液体种子培养基中，在23℃，180r/min回旋式恒温调速摇瓶柜中培养4d。

、发酵培养基

固体发酵培养基组分包含大米和麸皮，比例为1:1，培养基加水量70-80%(v/w)，初始pH自然；接种蛹虫草液体种子量为培养基干重的25%（v/w），23℃培养5d。