[发明专利]一种血清脂肪酶测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物试剂，具体涉及一种体外诊断试剂盒，尤其涉及一种血清脂肪酶测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

血清脂肪酶测定和血清α淀粉酶测定都是诊断各种胰腺疾病的重要的临床指标。作为急性胰腺炎的诊断，二者都有很高的灵敏度，但脂肪酶的特异性要优于α淀粉酶。急性胰腺炎时，在4-8小时内，脂肪酶的活性就会增高，24小时左右将达到峰值。随疾病的好转8-14天后降至正常水平。

血清脂肪酶(Lipase)测定方法很多，曾在临床实验室中应用的有比浊法、紫外法、比色法和干化学法等。比浊法的缺点是底物的乳化批间差大，直接影响测定结果，且稳定性差，不易保存。紫外法和比色法均为酶联速率法，须用多个工具酶，价格昂贵。Kodak干化学技术原理与比色法类似，与pH-Stat法比较有一个较大的负截距(-101U/L)。

目前，临床实验室中应用的脂肪酶测定试剂大都为Roche公司发展的脂肪酶测定(色团底物法)。其反应原理如下：

570nm波长测定△A，根据甲基试卤灵的摩尔消光系数或对照校准物可计算出脂肪酶的活力单位。

此法经欧洲，美国和日本七个实验中心评价：灵敏度较比浊法高4-5倍，不出现负值；不需要工具酶；反应线性时间大于5分钟，线性范围相对较宽(为320U/L，是正常人高限的5倍)；精密度好；几乎不存在内源性干扰等优点。但还存在不足之处：如1.色团底物的乳化是影响试剂的批间差和稳定性的关键，须进一步优化。2.线性范围虽已达320U/L，但在临床检测时还有部份高值样本超过此值，须稀释后重复测定，增加了工作量和费用。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种稳定，批间差小和线性范围宽的血清脂肪酶测定试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供了一种血清脂肪酶测定试剂盒，该试剂盒由下列试剂I和试剂II按2∶1的比例组成；

试剂I：N，N-双(2-羟乙基)-甘氨酸缓冲液50mmol/L、辅脂酶0.5-2.0mg/L、去氧胆酸钠0.42-0.83g/L、二水氯化钙1.47g/L、胆酸钠1g/L；

试剂II：酒石酸缓冲液10mmol/L、牛磺去氧胆酸3.4-7.1g/L、胆酸钠1g/L、聚乙二醇4000为0.5-1.5g/L、磷脂0.05-0.2g/L、色团底物150-200mg/L；

所述N，N-双(2-羟乙基)-甘氨酸缓冲液的pH值为8.0，所述酒石酸缓冲液的pH值为4.0；

所述试剂I和试剂II还添加有去污剂和防腐剂。

本发明的另一目的是提供了血清脂肪酶测定试剂盒的制备方法，

所述试剂盒由下列试剂I和试剂II按2∶1的比例组成；

试剂I：pH8.0的N，N-双(2-羟乙基)-甘氨酸缓冲液50mmol/L、辅脂酶0.5-2.0mg/L、去氧胆酸钠0.42-0.83g/L、二水氯化钙1.47g/L、胆酸钠1g/L；

试剂II：pH4.0的酒石酸缓冲液10mmol/L、牛磺去氧胆酸3.4-7.1g/L、胆酸钠1g/L、0.5-1.5g/L聚乙二醇4000、磷脂0.05-0.2g/L、色团底物150-200mg/L；

所述制备方法包括下列步骤，以试剂I4L，试剂II2L为例：

(一)试剂I制备(4L)

(1)先配制N，N-双(2-羟乙基)-甘氨酸缓冲液：向容器内加入去离子水3.5L，加N，N-双(2-羟乙基)-甘氨酸40.5g，1500转/分，搅拌10分钟，使N，N-双(2-羟乙基)-甘氨酸完全溶解，用4N NaOH调pH至8.0，去离子水补足到4.0L，加生物防腐剂适量；

(2)将下例组份，去氧胆酸钠1.68-3.32g、二水氯化钙5.88g、胆酸钠4g和辅脂肪酶2-8mg分别加入到上述缓冲液中，1500转/分，搅拌10分钟，使加入组份完全溶解，再加生物防腐剂适量，混匀即为试剂I；

(二)试剂II制备(2L)

(1)先配制酒石酸缓冲液：向容器内加入2L去离子水、加酒石酸1.0g、酒石酸钠3.1g，1500转/分，搅拌10分钟溶解，测pH应为4.0；

(2)将下例组份：牛磺去氧胆酸6.8-14.2g、胆酸钠2g、聚乙二醇40001-3g、磷脂0.1-0.4g加入到酒石酸缓冲液中，1500转/分，搅拌10分钟使加入组份完全溶解，再加生物防腐剂适量；此为试剂II基础液；