[发明专利]一种用于检测心脑血管疾病酶活性的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，具体地说，涉及一种用于检测心脑血管疾病酶活性的试剂盒。

背景技术

心脑血管疾病与恶性肿瘤、中老年感染性疾病，是威胁人类健康的三大杀手。心脑血管病的发生、发展与人们的日常生活密切相关，其发病率在我国有逐年增高的趋势，近年来已经成为危害人类健康的头号杀手，具有“发病率高，死亡率高，致残率高，复发率高”以及“并发症多”的四高一多的特点。

心脑血管疾病已被世界卫生组织认定为危害人类健康的“头号杀手”。全世界每年约有1500万人死于心脑血管病，我国每年约有400万人死于此病，占死亡人数的60％以上。全世界心脑血管病发病率最高的国家地区就在中国，中国以北方为高发病区。我国每小时就有300人死于心脑血管病，即每12秒1人。对心脑血管病的预防和治疗刻不容缓。

治愈疾病最好的方法就是提早发现，防范于未然。尤其针对心脑血管病四高一多的特点，人们急需一种能早期检测心脑血管病的方法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种用于检测心脑血管疾病酶活性的试剂盒，用于快速监控和预测冠心病心肌梗塞和心脑血管血栓发病前血中Lp-PLA2酶的浓度。Lp-PLA2具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。因此Lp-PLA2从炎症细胞中产生和释放也可以被解读成为一个极佳的前炎症反应指标，通过检测循环系统中的Lp-PLA2酶水平，可以独立的预测心脑血管的病发。病人血中Lp-PLA2酶的浓度突然升高，将强烈警示病人在短期内可能发生心脑血管血栓的高度危险性。心脑血管血栓也就是俗话说的脑血栓中风，发病死亡率都极高。Lp-PLA2的检测可以帮助病人在发病前警示发病的危险性，从而进行及时的预防或治疗，有效降低发病造成的死亡率。

其技术方案如下：

一种用于检测心脑血管疾病酶活性的试剂盒，其组成成分包括：酶标板、标准品、样品稀释液、样品稀释液、显色液、酶标记物、浓缩洗涤液、终止液和覆膜，

所述标准品：浓度为6,000pg/ml，3,000pg/ml，1,500pg/ml，750pg/ml，375pg/ml，187.5pg/ml，93.75pg/ml，0pg/ml；

所述样品稀释液为碳酸盐缓冲液；

所述显色液为四甲基苯胺；

所述酶标记物为碱性碳酸酶；

所述浓缩洗涤液为含吐温20的10倍浓缩的磷酸缓冲盐；

所述终止液：2MH₂SO₄。

进一步，所述酶标板的材质为聚苯乙烯PS。

进一步，所述标准品临用前15分钟内配制，以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒、搓动以助溶解，如配制3,000pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)6,000pg/ml的上述标准品加进含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

本发明的试剂盒检测过程简便，快捷，费用低，准确率高。

具体实施方式

下面结合实施方式进一步说明本发明的技术方案。

本发明的原理为：用纯化的人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PL-A2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PL-A2)，再与HRP标记的脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PL-A2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PL-A2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PL-A2)含量。

样本处理

血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。