[发明专利]一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法

权利要求书

1.一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法，其特征在于，所述测试方法为荧光光谱法，所述离子为金属离子，所述方法包括以下步骤：

步骤一：制备缓冲溶液：用去离子水配制pH值范围在3～7的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液200～300ml，并加入氯化钠；

步骤二：制备金霉素的标样储备液：将金霉素用超纯水稀释，使其浓度为0.05g/L～0.2g/L，用超声溶解，密封备用；

步骤三：制备未添加肽段的磷脂单层囊泡：将质量为0.5～2.0mg二肉豆蔻酰磷脂酰甘油放入样品管，加入氯仿和甲醇体积比为2∶1混合溶剂80～150μl，待二肉豆蔻酰磷脂酰甘油完全溶解后吹入氮气直至溶剂挥发完全，脂质体在管的底部形成一层透明的薄膜，真空干燥15～25h后，向样品管中加入金霉素的标样储备液和缓冲溶液，在水浴中超声，得到单层囊泡，使得金霉素分散在单层囊泡的内部和外部；

步骤四：荧光检测：选择激发波长为280～380nm，测量步骤三制备的未添加肽段的磷脂单层囊泡荧光光谱图，记录其最大发射波长λmax1；将二价金属离子加入到步骤三的溶液中制备成待测液A，测量待测液A荧光光谱图，记录其最大发射波长λmax2；放置时间大于24h后，测量待测液A的荧光光谱图，记录其最大发射波长λmax3；

步骤五：制备添加肽段的磷脂单层囊泡：制备肽储备液，将质量为0.5～2.0mg二肉豆蔻酰磷脂酰甘油放入样品管，加入氯仿和甲醇体积比为2∶1混合溶剂80～150μl，加入体积为15～30μl的肽储备液，摇匀待二肉豆蔻酰磷脂酰甘油完全溶解后吹入氮气直至溶剂挥发完全，脂质体在管的底部形成一层透明的薄膜，真空干燥15～25h后，向样品管中加入金霉素的标样储备液和缓冲溶液，在水浴中超声，得到单层囊泡，使得金霉素分散在单层囊泡的内部和外部；

步骤六：荧光检测：选择激发波长为280～380nm，测量步骤五制备的添加肽段的磷脂单层囊泡荧光光谱图，记录其最大发射波长λmax4；将二价金属离子加入到步骤五的溶液中制备成待测液B，测量待测液B荧光光谱图，记录其最大发射波长λmax5；待其稳定后测量待测液B的荧光光谱图，记录其最大发射波长λmax6，比较λmax1～λmax6的数值结果。

2.根据权利要求1所述的一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法，其特征于，所述步骤一中的pH值范围在4～6；所述氯化钠的添加量为0.500～1.000g。

3.根据权利要求1所述的一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法，其特征在于，所述步骤二中的金霉素的标样储备液的制备方法为：采用电子天平准确称取金霉素标准样品0.500～2.000mg，使用超纯水在棕色容量瓶中定容到10mL，超声溶解，配制成0.05g/L～0.2g/L的储备液，密封置于4℃冰箱中备用。

4.根据权利要求3所述的一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法，其特征在于，所述步骤二中的金霉素的标样储备液浓度为0.1g/L。

5.根据权利要求1所述的一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法，其特征在于，所述步骤四中的激发波长为300～350nm。