[发明专利]一种红花钓钟柳的离体快速繁殖方法

说明书

技术领域

    本发明涉及植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种红花钓钟柳的离体快速繁殖方法。

背景技术

钓钟柳是玄参科钓钟柳属植物的俗称，多数为多年生草本,少数是一年生草本。钓钟柳花色丰富,花型多变,具有其独特的观赏品质,它们以广泛的适应性、丰富的自然色彩和多变的花形著称。因此,钓钟柳属植物被广泛应用于园林绿化,是优秀的园林观赏植物。现已被广泛引种于我国北京、上海、邯郸、杭州、张家港等许多地区。钓钟柳几乎全株都可药用，富含了环稀醚萜苷、苯乙醇苷、生物碱等多种化合物，其中,松果菊苷是目前人们在钓钟柳中发现的具有较高药用价值的化合物之一，其具有抗菌消炎、抗氧化等作用。

红花钓钟柳又名草本象牙红、五蕊花。由于色彩艳丽,花型多变,具有极高的观赏价值,是优秀的园林花卉材料,被广泛引种于我国各大城市。红花钓钟柳所含松果菊苷具有抗肿瘤、抗氧化、保护神经与肝脏、提高记忆力和免疫力等药理作用,在治疗老年痴呆症和心脑血管疾病等方面疗效突出。红花钓钟柳可通过播种、分株、扦插等方式进行繁殖。红花钓钟柳原始种多用种子繁殖。种子细小,且具有休眠性,播种发芽缓慢。目前关于钓钟柳的组培繁殖研究较少,有关红花钓钟柳的组织培养研究几乎没有。一种成熟的组织培养技术不仅能快速高效地提供大量优良苗木,还可为后期通过基因工程于段引入目的基因,增加红花钓钟柳次生代谢产物含量奠定基础。

发明内容

    本发明的目的在于提供出一种红花钓钟柳的离体快速繁殖方法，本发明以红花钓钟柳带芽茎段为外植体，经过诱导培养、继代培养、生根诱导、炼苗及移栽等过程建立了红花钓钟柳组培快繁体系，从而实现了本发明的目的。

 本发明的一种红花钓钟柳的离体快速繁殖方法，包括以下的步骤：

（1）丛生芽诱导：选取健壮红花钓钟柳植株一年生木质化带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成3.0～5.0cm长的带有2～3个腋芽的节段先用0.2%高锰酸钾溶液浸泡1～3h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒5～15min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到启动培养基进行诱导培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～5天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成丛生芽。

（2）继代培养：将诱导培养得到的丛生芽切割成单个芽并竖直向接种于增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。

（3）生根诱导：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为1.5～2.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。

（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高4cm以上的根系发达的试管苗培养瓶移出培养室,在室内放置3～5天后逐渐打开瓶盖于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入盛有田间土壤的营养杯中，以塑料薄膜覆盖5～10天后揭去，30天后统计成活率。

上述步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+1～3mg/L6-BA+0.01～0.5mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

上述步骤（2）所述的增殖培养基为MS+0.01～0.5mg/LNAA+1～3mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

上述步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～1mg/L NAA+0.1～1mg/L IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。