[发明专利]用于防治烟草青枯病的解淀粉芽孢杆菌B011及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物病害生物防治技术领域，具体涉及一种用于防治烟草青枯病的解淀粉芽孢杆菌B011及其应用。

背景技术

烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌[Ralstonia solanacearum(E.F.Smith)]引起的一种主要从根部侵入的土传病害，烟草青枯病病菌主要在土壤中及遗落土中的病株残体上越冬，通过根茎的伤口或次生根的根冠进入木质部，然后在整个维管束蔓延，引起严重的萎蔫最终导致烟草枯萎死亡。该病在我国南方烟区普遍发生，连作地烟草青枯病发生较严重，对烟草生产具有很大威胁。

由于烟草青枯病为土传性细菌病害,化学农药在大田施用的过程中表层土壤对其进行吸附影响了其防治效果，目前尚无防治烟草青枯病的特效药剂。由于青枯病主要通过土壤传播，其传播途径隐蔽，长期大量施用化学农药易使病菌产生抗药性和造成环境污染。随着人类环保意识增强，绿色防控烟草病虫害日益引起人们的重视，挖掘有效的生防菌资源并基于其开发和利用生物防治技术已成为目前防治烟草青枯病的重点和热点。

近些年来，人们开始利用拮抗细菌对植物病虫害进行生物防治，“以菌治菌”的防治模式也逐渐被大家所接受。其中内生菌以其独特的内生性而作为生防菌优势更为显著。内生细菌广泛分布于植物体内，是集生物农药与生物肥料等多方面优势于一体的天然资源菌株，具有广阔的理论研究价值与开发应用前景。挖掘能有效防治烟草青枯病的内生细菌菌株，对于防治烟草青枯病均有重要的意义。如中国专利(专利申请号为201010595753.3)公开的“一种防治烟草青枯病的方法”，包括：青枯菌的培养与纯化：取青枯病烟草叶脉，用无菌水浸泡，在培养基上筛选，选取流动性好的单菌落继续培养，保存纯化的青枯菌；噬菌体的筛选：取发生烟草青枯病的植烟土壤，过筛，去杂；取小颗粒用无菌水浸泡，离心后取上清液过滤，取滤液与青枯菌液共同培养，保存筛选的噬菌体；噬菌体富集培养、收集：在三角瓶中加入培养基和含青枯菌的无菌水，震荡培养后，再加入含噬菌体的无菌水，继续培养；离心培养液，取上清液，过滤，滤液备用；牙签用无菌水浸泡，冲洗、灭菌后烘干，冷却至室温，置于滤液中浸泡，取出后分装保存备用；烟草移栽后,用该牙签插于旺长时期烟草植株茎基部，防治烟草青枯病。又如中国专利(专利申请号为201310046171.3)公开的“防治烟草青枯病拮抗菌及其应用”，该拮抗菌为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)QJ-1和黑曲霉(Aspergillus niger)Ty-3；其中，QJ-1保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏日期：2012年7月5日，保藏号：CCTCC NO:M2012271；Ty-3保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏日期为：2011年7月8日，保藏号：CCTCCNO:M2011241。本发明的拮抗菌蜡状芽孢杆菌QJ-1和黑曲霉Ty-3组合可制成菌剂，将菌剂与有机物料发酵制成的微生物有机肥能提供有A效营养和功能菌，有效的防治烟草青枯病。还有中国专利(专利申请号为201210338294.X)公开的“防治烟草青枯病拮抗菌及其应用”，所用的生防微生物为烟草赖氨酸芽孢杆菌LysinibacillustobaccocumKpa菌株，该菌株2012年05月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCCNo.6161；该微生物通过产生活性物质抑制烟草青枯病菌的生长，且在烟草根际有很好的定殖能力，是一种具有工业化生产前景的菌株。菌剂为Kpa菌株可湿性粉剂，它对烟草青枯病菌有很好的防治效果，能用于漂浮育苗基质处理，移栽期和成熟期；利用Kpa菌株制备的Kpa菌株可湿性粉剂具有成本低、防效高、无残留、对人畜安全的特点，是烟草农业种植中防治青枯病菌的高效生物农药；该发明为烟草农业生产中青枯病的防治提供了一种具有较好防治效果的生防微生物。

发明内容

本发明的目的是提供一种对烟草青枯病有较好拮抗作用的内生细菌，该内生细菌对环境安全性好，且易于工业化生产。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是提供一种用于防治烟草青枯病的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)B011，该解淀粉芽孢杆菌B011的活体纯培养已于2014年11月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉大学)(地址：武汉市武昌珞珈山，邮政编码430072，电话：027-68752319)，保藏号：CCTCC NO：M2014576。

所述解淀粉芽孢杆菌B011的分离方法，其分离步骤如下：