[发明专利]一种一步薄层层析快速检测生物胺的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种一步薄层层析快速检测生物胺的方法，属于食品分析和安全技术领域。

背景技术

生物胺是一类具有生物活性含氮的低分子量有机化合物的总称；含有蛋白质和氨基酸的食品，在一定条件下通过氨基酸的脱羧反应或醛的胺化作用便可产生生物胺。目前已发现水产品、肉制品、干酪及乳制品、酒及各类发酵食品、蔬菜、水果、干果和巧克力等食品中均含有多种生物胺。过量的生物胺被证明对人体会产生一些不良的生理反应，在食品保藏学中，生物胺往往是在食品腐烂或发酵过程中产生；组胺和酪胺是存在于食品中含量最多、也是对人类健康影响最大的两种生物胺。

欧洲食品安全局(EFSA)将欧盟范围内含大量组氨酸鱼制品中组胺的含量制定为≤100mg/kg或100～200mg/kg；将用含大量组氨酸鱼类制作、在盐水中经酶熟化处理的制品组胺含量制定为≤200mg/kg或200～400mg/kg。EFSA对食品中的组胺含量没有加以限定，建议上限为100mg/kg(食品)或2mg/L(含酒精饮料)；美国食品药品管理局(FDA)基于组胺500mg/kg的毒性，制定美国国内金枪鱼、鬼头刀及相关鱼类中组胺的干预水平为50mg/kg。同时认为，500～1000mg/kg以上的组胺对人体健康有潜在危险。而对酪胺和苯乙胺的安全阈值，所给出的建议参考上限分别为100～800mg/kg和30mg/kg；我国GB2733—2005《鲜(冻)动物性水产品卫生标准》规定鲐鱼中组胺含量应低于1000mg/kg，其他鱼类中组胺含量应低于300mg/kg。

目前食品中生物胺的检测一般采用高效液相色谱(HPLC)，生物传感器等方法。这些方法均有一定的应用，也各有优缺点；如最常用的RP—HPLC法，一般认为其具有检测灵敏度高、定量分析准确和柱效高等优点，且有多个标准方法基于该技术实施；但是该方法需要高效液相色谱，且仪器预热平衡和分析等过程时间较长，速度较慢，灵活性较差。生物传感器由于其具有在线监测的能力被推崇，但是现有技术仍不是非常成熟，市场较少有可靠的成套装备，且价格较昂贵。

薄层色谱是一种无需昂贵的分析仪器，费用低，操作简便、快捷，检测限能够达到ng级别的方法。现已有效地应用于临床和生化检验、毒物分析、药材及其制剂真伪的鉴定、质量控制、含量测定和资源调查等方面。但是薄层色谱需先对样品进行衍生再进行薄层层析检测，其中对样品的衍生化处理最为关键，一般需要考虑到衍生剂的选择、衍生剂与样品液的体积比、衍生反应的时间和温度。

因此在食品加工和流通等环节迫切需要一种无需对样品进行衍生处理，将样品点在薄层层析板就能够检测的一步薄层层析检测生物胺的方法，从而满足现场快速检测的需要，切实保障食品安全。

发明内容

本发明的目的是克服上述现有技术中的缺点，提供一种一步薄层层析快速检测生物胺的方法，本发明设计巧妙、易操作、成本低、速度快、适于大规模应用。

本发明的第一个目的是提供一种快速检测生物胺的方法，所述方法包括：(1)活化硅胶的制备：对硅胶进行环氧基、氨基、醛基的活化，使硅胶依次接上环氧基、氨基和醛基；(2)活化薄层层析板的制备：活化好的硅胶介质分别进行调浆，铺板和层析板活化制得活化薄层层析板；(3)待测样品中生物胺的薄层层析分析：从待测样品中进行生物胺提取、生物胺提取液净化得到的生物胺净化液，点在活化的薄层层析板上，展开，检测目标生物胺的有无或者定量测定生物胺的含量。

所述步骤(1)，在本发明的一种实施方式中，是使用环氧氯丙烷、双环氧乙烷、苯氧基环氧丙烷、二—(环氧丙基)—邻苯并咪唑酮中的任意一种对硅胶进行环氧基活化。

所述环氧基活化，在本发明的一种实施方式中，环氧基的活化条件：以体积比1:0.5-1:2的0.4-1.2mol/LNaOH溶液与DMSO的混合液作为混合溶剂，震荡，活化温度为30-40℃，活化时间8-14h，环氧氯丙烷、双环氧乙烷、苯氧基环氧丙烷或二—(环氧丙基)—邻苯并咪唑酮的用量为2-10mL/g硅胶。

所述环氧基活化，在本发明的一种实施方式中，以环氧氯丙烷作为环氧基活化液，NaOH溶液浓度为0.8-1.0mol/L，NaOH溶液与DMSO体积比为1:1-1:1.5，活化温度为33-36℃，活化时间为10-12h，环氧氯丙烷的用量为4-7mL/g硅胶。

所述步骤(1)，在本发明的一种实施方式中，是使用氨水、氯胺、乙二胺、双氯胺中的任意一种对硅胶进行氨基活化。