[发明专利]一种同时测定半夏中有机酸、核苷和麻黄碱的HPLC方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及半夏药材和制剂中同时测定六种有机酸、三种核苷和麻黄碱的分析技术。六种有机酸分别是草酸，甲酸，苹果酸，乙酸，柠檬酸和琥珀酸；三种核苷分别是尿苷，腺苷和鸟苷。

背景技术

半夏为天南星科植物半夏Pinelia temate(thumb.)Breit.的干燥块茎，具有燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结之功效，临床应用非常的广泛。

半夏含有多种化学成分，主要包括有机酸类、核苷类、生物碱类等。其中总游离有机酸具有止咳、祛痰、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等作用，2010年版中国药典以半夏中总游离有机酸的含量作为评价半夏质量的指标，其中所含有机酸主要有草酸、甲酸、乙酸、苹果酸、柠檬酸和琥珀酸等。半夏中所含的核苷类也是其中药及制剂的重要有效成分，并把其作为复方中半夏的水溶性指标成分进行检测，作为判别半夏药材及制剂质量优劣的重要依据，含量较高的有尿苷、鸟苷和腺苷等。麻黄碱是半夏含有的总生物碱中主要成分之一，具有平喘、止咳等作用，且麻黄碱含量的高低与镇咳祛痰作用密切相关。

近几年，半夏在组织培养、种属鉴定、药理、临床研究等方面取得了重大进展，但在有效成分的含量测定及质量控制等研究较少，药典对半夏的鉴别除了显微鉴别外，仅检查精氨酸、丙氨酸、缬氨酸和亮氨酸是否存在，《中国药典》2010版中半夏药材的质量控制是采取电位滴定法对醇提取物中有机总酸进行测定，且所含总酸仅以琥珀酸计，这对于半夏的质量控制是远远不足的。由于半夏所含有效成分较多，且针对不同疾病所需要的有效成分不同，故本发明采用HPLC法同时测定半夏药材及饮片中的六种有机酸、三种核苷和麻黄碱的含量，较电位滴定法具有更高灵敏度、高效能和高专属性，且可为控制半夏药材及饮片质量提供重要的参考依据。

目前将这六种有机酸，三种核苷和麻黄碱同时进行检测定量的未见文献报道。

发明内容

本发明采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)对半夏提取物中的六种有机酸、三种核苷和麻黄碱成分同时进行测定。本发明所述的同时测定半夏提取物中六种有机酸、三种核苷和麻黄碱成分的HPLC方法高效、快速，重复性和精密度良好，且样品前处理简便、操作快速，可为半夏药材和制剂的质量控制提供依据。

本发明所提供的技术方案可以是：

采用高效液相色谱法进行测定，该高效液相色谱法的色谱条件如下：Boston Green ODS(4.6mm×150mm，5μm)色谱柱，流动相为流动相为磷酸缓冲液(0.01mol/LKH₂PO₄用磷酸调pH为2.3)-甲醇溶液，梯度洗脱(0-5min，甲醇2％；5-15min，甲醇2％→20％；15-20min，甲醇20％)，流速1mL/min，进样量20μL，柱温30℃，检测波长210nm。所述方法包括标准溶液制备、标准曲线制作、样品处理和样品含量测定。

标准溶液制备：分别精密称取草酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、尿苷、鸟苷、腺苷、麻黄碱标准品各50mg、60mg、63mg、60mg、10mg、12mg、16mg、20mg，加水溶解并稀释后，得草酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、尿苷、鸟苷、腺苷、麻黄碱浓度分别为74μg·mL^-1，178μg·mL^-1，189μg·mL^-1，178μg·mL^-1，12μg·mL^-1，11μg·mL^-1，14μg·mL^-1，3μg·mL^-1。分别精密吸取0.1ml甲酸、乙酸标准溶液，加水稀释后，得甲酸、乙酸浓度为226μg·mL^-1、373μg·mL^-1对照品溶液。精密吸取各对照储备液5ml于50mL量瓶中，摇匀，得混合对照品溶液。