[发明专利]一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒及其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于纳米生物传感以及生物检测技术领域，具体涉及一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备以及应用于T3甲状腺激素及乳腺癌抗原的快速检测方法。

背景技术

目前，乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10％，已成为威胁妇女健康的主要病因。由于癌症早期症状不明显，很难被及早发现，并且严重危害妇女健康，因而癌症的早期诊断和治疗仍是亟待解决的最重要的医学问题之一。T3甲状腺激素是维持机体正常代谢，促进生长发育所必需的重要激素。甲状腺激素主要是促进蛋白质合成，特别是使骨、骨骼肌、肝等蛋白质合成明显增加，这对幼年时的生长、发育具有重要意义。而甲状腺激素的过多或过少都会直接危害人体健康，促使疾病的产生。

金纳米簇由于具有荧光强度高、强抗光漂白的能力、良好生物兼容性、低毒性和好的荧光稳定性等优点而得到广泛关注。研究表明金纳米簇具有一定的催化能力，在金纳米簇的存在下，H₂O₂能快速氧化3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)使其变蓝，基于此，我们建立一种双模检测的新方法，既可利用颜色变化对双氧水进行可视化半定量检测，又可以通过吸光度的大小对双氧水的准确含量进行定量检测。同样，金纳米颗粒由于制备简单方便、性质较稳定、生物相容性好等优点被广泛用于生命分析化学中。由氯金酸通过还原法可以方便地制备出各种不同粒径的纳米金颗粒，其颜色依直径大小而呈红色至蓝色。同时，金纳米颗粒随直径的变化呈现出不同的颜色，其紫外吸收峰也会相应发生变化。在金纳米颗粒的制备中，双氧水溶液是重要的反应物之一，而金纳米簇能催化金纳米颗粒制备条件中的双氧水使其分解，之后双氧水的浓度发生改变，金纳米颗粒就会呈现出不同的颜色，从红色、紫红色至蓝色。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒，它快速准确的检测T3甲状腺激素以及乳腺癌抗原，使金纳米簇成功取代传统的酶联免疫吸附反应中的生物酶，显著提高检测的灵敏度以及稳定性。

本发明基于金纳米簇模拟酶试剂盒，它包括如下物质：96孔聚苯乙烯微孔板、T3甲状腺激素抗体或者乳腺癌抗体、金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体或者金纳米簇标记的乳腺癌抗体、样品稀释液、PBS缓冲溶液、终止缓冲溶液、显色底物。

具体的，所述金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体是：使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将T3甲状腺激素抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得；所述金纳米簇标记的乳腺癌抗体是：使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将乳腺癌抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得。

具体的，所述样品稀释液是：将T3甲状腺激素溶液首先用NaOH溶液进行稀释之后，再用pH＝7.2—7.4、浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液稀释成浓度为2×10^-12至2×10^-16mg/mL的溶液；或者是：将乳腺癌抗原用pH＝7.2—7.4、浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液稀释成浓度为7.52×10^-9至7.52×10^-14U/mL的溶液。

具体的，所述显色底物是以浓度为4mmol/L的柠檬酸三钠溶液、浓度为320μmol/L的双氧水溶液和浓度为2mmol/L的氯金酸溶液所制备的金纳米颗粒溶液，三种溶液的体积比为1：1：1。

具体的，所述终止缓冲溶液为浓度为1mg/mL的BSA溶液。

本发明的目的之二在于提供上述基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备方法，它包括如下步骤：

(1)将T3甲状腺激素抗体或者乳腺癌抗体接到96孔聚苯乙烯微孔板上，4℃下反应过夜，三次PBS缓冲溶液冲洗后，加入终止缓冲溶液即浓度为1mg/mL的BSA溶液反应1小时；

(2)三次PBS缓冲溶液冲洗后，再在不同微孔板中加入各种浓度的样品稀释液，即稀释成浓度为2×10^-12至2×10^-16mg/mL的T3甲状腺激素溶液或者稀释成浓度为7.52×10^-9至7.52×10^-14U/mL的乳腺癌抗原溶液，反应3小时；

(3)三次PBS缓冲溶液冲洗后，再对应加入金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体或者金纳米簇标记的乳腺癌抗体，反应3小时；