[发明专利]一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的体外迷你报告基因及应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体地说，是一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的体外迷你报告基因及应用。

背景技术

癌症占人类死亡病因的近1/4。在过去的几十年里肿瘤复发和转移仍是改善整体存活率的主要障碍，这可能主要归因于人们对于癌症生物学仍然缺乏全面的了解。例如，功能基因组学研究的最新进展表明，参与人类基因转录的绝大多数是非编码RNA包括长链非编码RNA(lncRNAs)。然而，对于lncRNAs在调控癌症基因表达及机制等方面人类仍然所知甚少[1]。

近期我们通过对肿瘤表观遗传机制的研究发现lncRNAs可以通过多种机制调控肿瘤的进展。新近有研究表明lncRNAPCGEM1可以与雄激素受体(AR)结合作用[2]。PCGEM1在前列腺癌上调[3]，可促进细胞增殖[4]，而我们则通过临床标本研究发现，PCGEM1以及PCAT1的基因表达与前列腺癌恶性程度及转移复发呈高度相关性，PCGEM1不但可以通过与AR直接作用，更重要的是PCGEM1与AR异构体,如AR-V7(AR3)的表达呈高度正相关，我们进一步证明了PCGEM1通过选择性转录修饰调控了AR的异构体如AR3的表达。由此发现lncRNAs如PCGEM1可能通过调控AR基因转录的表观遗传机制参与AR相关肿瘤的增殖、恶性侵袭复发及转移驱动。因为在一定程度上是由于AR的异构体如AR3介导了该类肿瘤的激素去势抵抗，而并非野生型全长AR。而研究已表明AR3在AR在很大程度上诱导形成了相关肿瘤如前列腺癌的激素去势抵抗[5]。

针对上述AR相关肿瘤的特异性调节lncRNAPCGEM1显著参与调控了与该类肿瘤的激素去势抵抗相关AR异构体(如AR3)的表达。本发明是建立在研究所表明的lncRNAPCGEM1或hnRNPA1和U2AF65参与调控的表观遗传机制的基础上，即lncRNAsPCGEM1通过调控雄激素受体异构体AR3pre-mRNA的转录后修饰及共定位，直接决定了表达雄激素受体的肿瘤如前列腺癌、肺癌及乳腺癌等的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移。

本发明涉及的迷你报告基因质粒主要是建立在表观遗传机制调控的基础上，如lncRNAPCGEM1通过调控雄激素受体异构体AR3pre-mRNA的转录后修饰，直接决定了表达雄激素受体的肿瘤如前列腺癌、肺癌及乳腺癌等的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移。应用该迷你报告基因，可以验证lncRNA PCGEM1或hnRNPA1,U2AF65等转录修饰剪切因子的作用机制。上述调节因子可以通过该迷你报告基因上表现出经基因转录后修饰机制对雄激素受体(AR)异构体产生的调控作用。一方面，该迷你报告基因用于预测前列腺癌等雄激素受体相关肿瘤的激素去势复发及转移的高度危险因子；另一方面，通过该迷你报告基因，可以能够直观和高效、准确的验证和阻断该特异性目标基因位点的表达及作用。最终服务于临床雄激素受体相关肿瘤的激素去势治疗后复发及转移的靶向治疗。为临床有效靶向阻断PCGEM1所介导的雄激素受体异构体AR3，可以有效的降低雄激素受体(AR)相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移情况。本发明的AR3迷你报告基因及试剂盒是基于当前最新的研究结果而建立。这是一种目前其他方法都无法替代的技术方法，迄今为止尚未见相关报道。

参考文献：1.Xie C,Yuan J,Li H,Li M,Zhao G,Bu D,et al.NONCODEv4:exploring the world of long non-coding RNA genes.Nucleic acids research.2013；doi:10.1093/nar/gkt1222.

2.Yang L,Lin C,Jin C,Yang JC,Tanasa B,Li W,et al.lncRNA-dependent mechanisms of androgen-receptor-regulated gene activation programs.Nature.2013；29:598-602.

3.Srikantan V,Zou Z,Petrovics G,Xu L,Augustus M,Davis L,et al.PCGEM1,a prostate-specific gene,is overexpressed in prostate cancer.Proceedings of the NationalAcademy ofSciences ofthe United States ofAmerica.2000；97:12216-21.