[发明专利]末梢循环癌细胞的检测装置

说明书

提供一种可以简单而且高精度的检测出末梢循环癌细胞的检测方法。末梢循环癌细胞的检测方法，是一种从生物试样中检测出循环癌细胞的检测方法，包括以下(a)～(d)工序。(a)从末梢血中分离出淋巴细胞的分离工序、(b)将分离的末梢血淋巴细胞层放在培养液中培养的培养工序、(c)培养后，将粘着于培养容器底部的细胞实施免疫染色的免疫染色工序、(d)根据从免疫染色工序中取得的染色细胞的观察图像，从生物试样中检测出循环癌细胞的检出工序。

技术领域

本发明涉及一种可以简单的检测出末梢循环癌细胞(CTC；Circulating TumorCell)的检测方法及检测装置。

背景技术

向来，已知的末梢循环癌细胞(CTC)以106～107个的末梢血单核细胞中1个 的超低浓度，从上皮衍生的癌症患者的末梢血中观察到。恶化的癌细胞在血液或淋 巴液中循环流动，导致向远隔器官转移，因此CTC被认为是主要原因。

在乳癌或大肠癌等转移性癌症的案例中，血液中的CTC已被认可对治疗效果的 判定或作为预后因素是有用的，比如，已知的有美国Veridex公司开发的关于乳癌、 大肠癌等领域的检测系列的CellSearch(注册商标)系统。CellSearch(注册商标)系 统，利用抗EpCAM抗体固定化磁珠，将CTC浓缩分离后，通过免疫染色法来标记CTC， 计数出试样中的CTC(例如，请参照非专利文件1)。

此外，鉴于癌细胞对尿激酶(尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA))及其受 体(尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂受体(uPAR))的表达，还公开了以尿激酶的活 性为指标，从而将CTC即简便且高精度的检测回收的循环癌细胞的检测方法(请参照 专利文件1)。

【专利文献1】特开2014-39480号公报

【非专利文献1】Riethdorf S et al.,Detection of circulating tumor cellsin peripheral blood of patients with metastatic breast cancer:a validationstudy of the CellSearch system.Clin Cancer Res.2007Feb 1；13(3):920-8.

发明内容

发明所要解决的技术问题

如上所述的CellSearch(注册商标)系统，对癌细胞表面的EpCAM(上皮细胞粘 附分子)表达，利用抗EpCAM抗体的固定化磁珠，来浓缩CTC。具体讲就是，通过 纳米铁粒子与抗EpCAM的抗体结合的磁性粒子，从血液众多的细胞中将异常的上皮细胞分离出。将分离出的上皮细胞与荧光标记后的细胞角蛋白单克隆抗体进行反应， 然后一起被荧光性的DNA染色物质将细胞核染色。此外，为了将白血球识别为CTC， 使荧光标记的CD45抗体发生反应。然后，将CTC的反应溶液转移到固定有磁铁的盒 子中。由磁铁产生的磁力使CTC移动到盒子上面。对显示在盒子上面荧光的发色状 况的荧光图像数据进行分析。

如上所述，在CellSearch(注册商标)系统中，浓缩CTC、将上皮细胞特别分离 出，将附在血液中的CTC利用磁铁来诱导，然后利用荧光发色，这样的检测方法或 检测装置变得很复杂。

鉴于以上情况，本发明以提供一种可以更简便且高精度的检测出末梢循环癌细胞的检测方法以及检测装置。

解决问题的方法

本申请的发明人，将从末梢血中分离出的淋巴细胞层进行培养，对粘着在培养 容器底部的粘着细胞进行深入研究的结果，发现利用细胞培养后的粘着细胞可以更 简单更精确的检测出末梢循环癌细胞。

也就是说，本发明的末梢循环癌细胞的检测方法，是检测生物试样中的循环癌 细胞的检测方法，包括以下（a）～（d）工序。

(a)从末梢血中分离出淋巴细胞的分离工序、和