[发明专利]用于生产芳香醇的方法

说明书

一种用于生产倍半萜醇的方法和组合物，该方法包括使倍半萜与具有单加氧酶活性的P450多肽接触。

技术领域

本领域涉及细胞色素P450s，及其生产倍半萜醇的用途。

背景技术

萜烃(比如α-檀香萜和β-檀香萜)通过生化途径(例如通过遗传改造的细胞)来生产。这些萜和源于该萜的醇是檀香油的主要组成成分，并且该醇是通常通过蒸馏檀香属物种(比如檀香木)的心材可商业获得的重要的香料成分。作为该醇的具体例，包括α-甜橙醇(α-sinensol)、β-甜橙醇(β-sinensol)、α-檀香醇、β-檀香醇、α-反-香柠檬醇和表-β-檀香醇。虽然发展出了新型生化途径(包括基因工程细胞)来生成萜烃，但仍期望发现一种生化途径来生成并生产源于檀香萜的醇。更进一步期望使用一种生化途径，其不仅能生成该醇，并且更期望能够通过该生化途径来选择性地生产该醇的顺式异构体，比如α-异甜橙醇(iso-α-sinensol)、β-异甜橙醇、(Z)-α-檀香醇、(Z)-β-檀香醇、(Z)-α-反-香柠檬醇和(Z)-表-β-檀香醇。

细胞色素P450s代表的是氧化酶类的酶族。P450s常用来催化单加氧酶反应。基于氨基酸序列的同源性，将细胞色素P450s酶分类为族和子族。相同子族的成员共享超过55％的氨基酸序列同一性并且具有通常相似的酶活性(底物和/或产物的选择性)。CYP71AV1(NCBI登录号ABB82944.1,SEQ ID No.51和52)和CYP71AV8(NCBI登录号ADM86719.1,SEQ IDNo.1和2)是CYP71AV子族的两个成员，并且共享78％的氨基酸序列同一性。CYP71AV1已被证明可氧化紫穗槐二烯(Teoh et al,FEBS letters 580(2006)1411-1416)。CYP71AV8已被证明可氧化(+)-朱栾倍半萜、大根香叶烯A和紫穗槐二烯(Cankar et al,FEBS Lett.585(1),178-182(2011))。

已经报道有：在使用工程细胞的工序中，使用萜合酶来催化生产二萜或倍半萜。使用细胞色素P450多肽对该二萜或倍半萜进行进一步处理，从而催化由细胞产生的二萜或倍半萜的羟基化、氧化、脱甲基化或甲基化。

发明内容

本发明提供一种用于生产倍半萜醇的方法，包括：

i)使式(I)的萜烯与多肽接触，

该多肽具有与从由SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8,SEQID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:38,SEQID NO:40,SEQ ID NO:42,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:52,SEQ ID NO:54,SEQID NO:58,SEQ ID NO:60,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:64,SEQ ID NO:66,SEQ ID NO:68,SEQID NO:71,SEQ ID NO:73,SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:81构成的群组中选出的多肽至少有约45％序列同一性的氨基酸序列；以及

ii)任选地分离上述醇，该醇中，R是由9个碳构成的饱和的、单不饱和或多不饱和脂肪族基团，并且R可以是支链或由一个或多个非芳族环组成。

本发明更进一步提供一种用于生产倍半萜醇的方法，该倍半萜醇包括α-甜橙醇、β-甜橙醇、α-檀香醇、β-檀香醇、α-反-香柠檬醇和表-β-檀香醇、澳白檀醇(lancelol)和/或它们的混合物，该方法包括：