[发明专利]凝集免疫测定法

说明书

技术领域

本发明涉及凝集免疫测定法，更特别涉及颗粒增强的凝集免疫测定法，其包括散射光强度的测量和吸光度的测量。

背景技术

在当前的临床试剂领域，很多试剂实际上用于在颗粒增强的凝集免疫测定法中使用。颗粒增强的凝集免疫测定法是利用携带用于分析物的一个结合配偶体或多个结合配偶体的载体颗粒测定分析物的方法。使用这样的试剂的免疫测定法利用自动化的分析仪进行，其可以通过简单操作在短的时间内获得结果。利用这样的自动化的分析仪进行的光学测量测定散射光的强度或吸光度，其任一个在单一免疫测定法中独立进行。

基于散射光强度的测量的免疫测定法提供高的灵敏度，但是具有非常窄的动态范围。由于其窄的动态范围，需要重复的样品稀释和重新测量，直到分析物的浓度在测定系统的测量范围内。因此，这样的免疫测定法耗费大量时间用于报告测定结果。

同时，本领域技术人员公知，与基于散射光强度的测量的免疫测定法相比，基于吸光度的测量的免疫测定法具有某种程度上的更宽动态范围，但在低浓度分析物的测量的准确性方面较低。

已知一些解决颗粒增强的凝集免疫测定法中的该问题的技术。例如，专利文件1旨在通过在不同波长进行测量提供更高灵敏度和更宽动态范围的测定方法。

专利文件2和3中公开的用于颗粒增强的凝集免疫测定法的试剂旨在通过使用两种不同尺寸的载体颗粒，结合与研究的分析物具有不同反应性的抗体提供更宽的动态范围。

相关技术

专利文件

专利文件1：日本专利申请公开号H08-043393

专利文件2：日本专利申请公开号H11-108929

专利文件3：日本专利申请公开号2001-289853

发明概述

专利文件1中公开的技术的本质是控制信号的绝对值。在低浓度的分析物，在短波长进行测量，其提供强的信号，并且在高的分析物浓度，在长波长进行测量，其防止信号超过分析仪的检测上线。遗憾地，如本领域技术人员已知的，微粒溶液的浊度取决于波长，并且在较长波长信号较弱。专利文件1中公开的技术仅通过选择波长控制某些光学变化的信号强度，从而可以通过分析仪检测信号，并且预期不对补偿颗粒增强的凝集免疫测定法中有限的准确性和动态范围的缺点具有显著的改善效果。

专利文件2和3中公开的用于测定的试剂中包含的较小颗粒经历了与凝集相关的小的光学改变并且可以大量配制，并且该试剂中包含的具有较低反应性的抗体具有低的凝集能力。因此预期两种技术都具有扩展动态范围的作用。遗憾的是，由于使用较小颗粒和使用具有较低反应性的抗体造成的光学改变和凝集能力的减少是实现预期的与测定的灵敏度相关的性质的障碍。

如上文所述，难以既实现增加的灵敏度也实现扩展的动态范围，并且实践中尚未使用实现这两种改善的颗粒增强的凝集免疫测定法。

本发明人考虑在颗粒增强的凝集免疫测定法中组合散射光强度和吸光度的测量用于单次测定，以实现具有增加的灵敏度和扩展的动态范围的测定，并且已经证明了这样的免疫测定法的潜能。

例如，如日本专利申请公开号2001-141654中公开的，一些常规分析仪可以基本上同时测量散射光的强度和吸光度。这样的分析仪仅旨在利用单个分析仪实践两种不同的分析方法：测量散射光强度用于凝集免疫测定法，并且测量吸光度用于分光光度测量以测定与酶或化学反应相关的光谱改变。常规文件既未描述也未提示，并且没有人想到，在单次测定中包括组合的两种测量的颗粒增强的凝集免疫测定法。

阻碍想到此方法的一种原因是颗粒增强的凝集免疫测定法的灵敏度和动态范围极大取决于用于测定的试剂的组成。如上文所述，分析物和携带用于分析物的一个结合配偶体或多个结合配偶体的载体颗粒之间在某段时间的反应导致的凝集程度通过选择用于测定的试剂的主要组分来控制，即，通过选择结合配偶体的类型或量，或载体颗粒的尺寸来控制。具体而言，使用较大颗粒和具有更高反应性的结合配偶体导致增加的灵敏度，并且使用较小颗粒和具有较低反应性的结合配偶体导致更宽的动态范围。基于此，为了颗粒增强的凝集免疫测定法中增加的灵敏度和扩展的动态范围，本领域技术人员将他们的努力集中于用于测定的试剂的设计。

遗憾的是，如上文所述，难以同时既实现增加的灵敏度的增加又实现扩展的动态范围，并且本领域技术人员常常必须设计用于测定的试剂，从而考虑这两种特征之间的平衡并且根据样品中分析物的目标值，以改善灵敏度或动态范围之一，同时牺牲另一个的性能。因此，其集中于对具有不同组成的用于测定的试剂的设计的努力对于改善两种性能二者以显著解决该问题是不足够的。