[发明专利]多重乙肝试验

说明书

背景技术

乙肝病毒导致肝病。很大比例的感染患者发展成慢性肝炎，导致肝损伤和后续的肝癌。乙肝感染的特征在于数种独特血清学和免疫学应答。感染的时间概况可用作监测疾病过程的有用指导并也可提供与疾病进程的血清学关联(参见例如，Elgouhari(2008)ClevelandClinicJ.Med.75：881和Juszczyk(2010)Vaccine18：S23)。

乙肝病毒含有两种主要病毒蛋白，表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)。感染后，HBsAg首先变得可检测到，之后是出现宿主生成的抗-HBcIgM。抗-HBs抗体在HBsAg消失几个月后出现，并且在无限期内保持可检测到。在“窗口期”期间(当出现HBsAg和出现抗-HBs之间存在16-32周的间隔时)，抗-HBc提供了目前或最近HBV感染的血清学证据。然而，抗-HBcIgM和抗-HBc(IgM和IgG)的存在并不表明感染的消退或保护性免疫。抗-HBs的出现和HBsAg的消失指示感染的消退和保护性免疫。此外，在没有HBsAg和抗-HBc存在时存在抗-HBs指示成功接种疫苗的个体。

乙肝血清学测试包括测量数种乙肝病毒特异性抗原和抗体。跟踪HBV感染和例如在感染、爆发和消退之间分化的能力对于临床控制而言是重要的。所有市售的乙肝抗体测试试剂盒在每个反应容器中于同一时间进行一个测试。任意给定的测试的结果不能预测乙肝感染或消退的过程或阶段，因此必须进行多重测试，其浪费时间、样品和试剂。此外，药品提供者可能不会命令立即测试所有的相关HBV标记物，使得对象可能会被召唤测试多次。重复抽血是繁重且昂贵的，并且可导致不依从和不理想治疗。参见例如Stramer等，(2012)Transfusion52：440。

发明内容

本文提供了用于在对象中同时检测多重乙肝病毒(HBV)抗体，使得能够确定对象的HBV状态。本文所述的试剂盒提供了确定对象是否已经接触HBV、患有HBV感染、曾经患有HBV感染、或已经针对HBV免疫的快速高效试验。这类试剂盒包含(a)包含或基本由固体支持物(例如珠)的混合物组成的容器，其中混合物包含与HBsAg、HBcAg和抗-IgM之一偶联的固体支持物；和(b)包含偶联剂1的容器(如下所述)。在一些实施方式中，混合物中的三种类型的固体支持物(例如，珠)可互相区分，例如，不同的尺寸、密度、重量、吸光度或可检测标记物。在一些实施方式中，混合物中的三种类型的固体支持物各自与不同的可检测标记物偶联，例如，荧光标记物或荧光标记物的组合。在一些实施方式中，固体支持物是磁力响应性的。在一些实施方式中，偶联剂1包含或基本由标记的HBsAg和标记的HBcAg组成，其中HBsAg和HBcAg上的标记物是不同的或相同的，并且其中标记物用于间接检测(例如，生物素、链霉生物素、毛地黄皂苷等)或直接检测(例如，荧光团或发光剂)。

在一些实施方式中，该试剂盒还含包含偶联剂2的容器。在一些实施方式中，偶联剂2包含或基本由与某一试剂偶联的可检测标记物组成，该试剂特异性结合偶联剂1中标记的HBsAg和标记的HBcAg。例如，在一些实施方式中，偶联剂1包含或基本由生物素化的HBsAg和生物素化的HBcAg组成，并且偶联剂2包含或基本由与可检测标记物，例如荧光团如藻红蛋白(PE)或荧光素异硫氰酸酯(FITC)偶联的链霉亲和素。本领域技术人员将认识到链霉亲和素和生物素可在之前的示例中切换或者被其它结合对代替。

在一些实施方式中，该试剂盒还包含待加入样品的至少一种内部对照物，例如，在容器中或在不同的容器中。在一些实施方式中，内部对照物是固体支持物，例如，珠，其中固体支持物与某一试剂偶联，该试剂将结合样品中已知的分析物(样品验证对照物，例如针对凝集因子如FXIII的抗体，其中样品是血液)。对于其它支持物，内部对照固体支持物也将是可区分的，例如与不同的可检测标记物偶联，所述可检测标记物例如荧光标记物或荧光标记物的组合。在这类实施方式中，偶联剂1还将包含标记的试剂以检测内部对照固体支持物上的试剂-分析物结合，例如针对分析物的另一种抗体(例如，标记的抗-FXIII)。在一些实施方式中，内部对照物标记物是不同或相同的，并且可以是用于直接或间接检测的标记物。在一些实施方式中，内部对照物是固体支持物，例如，珠，其中固体支持物与可检测标记物偶联，使得其可与其它固体支持物区分，例如，不同的荧光标记物或荧光标记物的组合(内部标准对照物)。