[发明专利]一种用于卫生制剂、医药及化妆品工业发展的保存和稳定蛋白质的方法在审
申请号: | 201480028046.2 | 申请日: | 2014-09-23 |
公开(公告)号: | CN105209476A | 公开(公告)日: | 2015-12-30 |
发明(设计)人: | 特奥多罗·马亚友·法洛 | 申请(专利权)人: | 萨尼雷德有限公司 |
主分类号: | C07K1/02 | 分类号: | C07K1/02;A61K47/44 |
代理公司: | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人: | 郝传鑫;熊永强 |
地址: | 西班牙巴*** | 国省代码: | 西班牙;ES |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 卫生 制剂 医药 化妆品 工业 发展 保存 稳定 蛋白质 方法 | ||
发明目的
如题所述,本发明涉及一种用于卫生制剂、医药及化妆品工业发展的保存和稳定蛋白质的方法。
本发明的目的在于提供一种方法,该方法设想建立一种分散系统,该分散系统作为蛋白质在常温常压下、在油相中的保存、稳定和贮藏手段。具体地,本发明提出的方法基于蛋白质掺入由各成分组成的介质中,例如细胞生长因子(如表皮生长因子EGF和成纤维细胞生长因子bFGF),但不限于此,所述各成分组成的介质如葡萄籽油、由多种化合物组成的基底(所述多种化合物在本说明书下文中会详细说明)和丁基羟基甲苯(BHT),形成所述油相。具体地,本发明所提出的方法利用油相成分的某些化学基团促进蛋白质残基的物理-化学作用,使蛋白质天然分子结构维持更长一段时间。因此,本方法简单、经济、具有普适性,对取代通常用于保存蛋白质的复杂保存技术和/或采用水的方法具有潜在的能力。
技术领域
本发明可用于工业化学领域,特别是致力于制造药剂及化妆品的工业,尤其是意在保存生长因子的工业。
背景技术
目前,蛋白质稳定性在化学、药剂和化妆品领域备受关注。蛋白质在许多疾病治疗中作为活性物质,例如糖尿病、癌症、血友病、心肌梗塞等(Krishnamurthy和Manning,2002)。值得注意的是,近年来,利用蛋白质结构已引起化妆品工业的极大兴趣,例如生长因子、表皮生长因子(EGF)。如果蛋白质不能得到恰当的稳定化,会失去其天然结构,以致丧失其生物活性(Krishnamurthy和Manning,2002)。
但问题是蛋白质的稳定化是特别困难的,因为蛋白质非常容易发生降解现象:物理降解、化学降解和酶降解。化学降解涉及脱氨、氧化、还原、水解过程和一些化学相互作用,如二硫键相互作用。物理降解包括表面吸附、聚集、解离、变性和光解过程。此外,还有一些影响与分散介质特性相关的蛋白质聚集的因素,如温度(与蛋白质构象改变的热力学和动力学有关)、pH值(与蛋白质残基与正/负电荷的相互作用有关)、离子强度(与与带电基团相互作用的盐、浓度有关)和表面活性剂(与构象热力学稳定性有关)(Chi等人,2003)。
现有技术工艺可确保蛋白质保持天然构象更长一段时间,这些工艺可以为物理方法,如冷冻(低于-10℃)或冷冻干燥(用于消除蛋白质水溶液的湿气),但是,通过这些方法得到的产品也会降解;或通过添加共溶剂的化学方法(Chang和PIKAL,2009)。
EGF是首先被分离并被视为生长因子的多肽。EGF具有生物活性,能够刺激角化细胞和成纤维细胞的增殖(随后形成胶原蛋白),促使血管再生(即,形成新的血管),并且在它应用的区域形成后续血管,EGF这些生物活性与其天然结构有关。这些特性可促进具有一定厚度的新皮肤的生成,恢复皮肤弹性和紧实度,从而减少细胞氧化带来的影响,并消除皱纹(Tang等人,1994)。这种生长因子最近已开始用于一些制剂中,其中在有关组织再生、加速烧伤愈合、治疗瘢痕疙瘩、痤疮和妊娠纹方面已获得非常良好的效果,甚至可以改善一些治疗效果,如手术、合并植皮,以及剥落后的应用。然而,虽然在医药和化妆品行业正越来越多地使用该蛋白质,但由于其价格高和难以稳定,因此还没有被大量使用(Schouest等人,2012)。
成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种生长因子,其作用是增加有丝分裂活性指数及DNA合成,促进各种前体细胞的增殖,如软骨细胞、纤维细胞和成骨细胞等,所述前体细胞形成主体的纤维、结缔组织和支持组织。成纤维细胞生长因子有助于伤口的愈合、造血、血管生成或胚胎发育,因此可表现出截然不同的作用:一)有利于受损组织愈合期间的上皮再形成;二)有血管形成诱导活性;三)参与血细胞系的分化过程;以及四)参与骨骼肌和心肌分化、肺部成熟和内胚层细胞的肝细胞特化。
因此,本发明的目的是提供一种保存和稳定蛋白质的新方法,该方法可用于卫生制剂、医药及化妆品工业发展,且不同于传统的方法。该方法在油相中进行,使得它更简单和经济。需要指出的是,申请人不知晓公开了与本申请提出的用于保存和稳定蛋白质的方法类似的技术特征的任何公开文件或类似发明。
发明内容
一种用于分散蛋白质的介质,所述介质的成分为所述介质提供油性特质。如上所述,EGF、bFGF和其它细胞生长因子和/或蛋白质为大分子,难以稳定化,因为目前多数的分散手段为水性特质,通过采用分散系统可获得短期的稳定,例如乳剂,或一些昂贵、特殊的方法,但是这些方法又不能确保蛋白质天然结构得以长期维持,例如冻干。
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- 本文公开了从式(II)的氨基酸衍生物开始制备式(I)的假脯氨酸二肽的方法,在式(I)中R1是α-氨基酸的侧链,R2是氨基保护基并且R3和R4独立地选自氢或C1-4-烷基,前提是R3和R4不都是氢,R5是氢或甲基,在式(II)中R1和R2如文中所述。假脯氨酸二肽可以用作Ser、Thr和Cys的可逆保护基并且因此在肽化学中是万能工具。
- 使用N-羧酸酐(UNCA)的肽合成方法-200980108399.2
- 罗兰·卡伦斯;洛朗·让尼 - 索尔维公司
- 2009-03-06 - 2011-02-09 - C07K1/02
- 用于制备肽或肽衍生物的方法,该方法包括至少一个步骤,在该步骤中使游离氨基酸或游离肽与氨基甲酸酯保护的氨基酸N-羧酸酐(UNCA)溶液进行反应。
- 制备普兰林肽的方法-200880022433.X
- 安德烈·布伦纳;奥列格·韦布特斯基;史蒂芬·瓦尔瑞;弗朗西斯卡·夸特里尼;霍尔格·赫尔曼;安德鲁·斯壮;费尔南多·阿尔贝利西欧;茱蒂特·图拉一普赫;耶西卡·加西亚·拉莫斯 - 隆萨股份公司
- 2008-06-30 - 2010-07-28 - C07K1/02
- 具有37个氨基酸序列KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2的普兰林肽可通过由分别包含氨基酸残基1-12、13-24和25-37的片段通过汇集三片段合成策略制备得到。
- 一种双甘氨肽的合成方法-200810121715.7
- 严海燕;吴菁 - 湖州来色生物基因工程有限公司;吴菁
- 2008-10-23 - 2010-06-30 - C07K1/02
- 本发明公开了一种双甘氨肽的合成方法。以甘氨酸为原料,通过加入甘油,于175~180℃搅拌回流反应,冷却后加入蒸馏水并放入冰箱过夜。经过抽滤,并用乙醇洗涤后得中间产物2,5-哌嗪二酮。2,5-哌嗪二酮在NaOH存在下水解,加入盐酸并调节pH至6.0后加入乙醇在冰箱中置过夜。最后抽滤,用乙醇洗涤至无氯离子为止,即得双甘氨肽,产率为81%。该法操作简单易行,且不易造成环境污染,适合于工业化生产。
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