[发明专利]裂谷热病毒糖蛋白GN和GC及其用途

说明书

本发明描述了亚单位疫苗，所述亚单位疫苗包含裂谷热病毒的Gn和Gc糖蛋白，包括编码此类糖蛋白的核酸、宿主细胞、载体和用所述糖蛋白产生的免疫试剂、接种疫苗的方法、诊断的方法和试剂盒。

本研究根据由国土安全部的针对新兴人畜共患动物疾病的卓越中心(Departmentof Homeland Security Center of Excellence for Emerging and Zoonotic AnimalDiseases)授予的授权号2010-ST0-AG0001，在政府支持下做出。政府在本发明中拥有一定的权利。

发明背景

发明领域

本发明通常涉及免疫试剂，并且更具体地涉及裂谷热病毒(RVFV)糖蛋白和它们作为疫苗组分和作为用于疾病诊断和检测的部分的用途，包括使用这样的糖蛋白的方法。

背景信息

裂谷热病毒(RVFV)是蚊子传播的人畜共患病原体，其在牲畜和人类两者中引起高发病率和死亡率。该病毒已在非洲和阿拉伯半岛在反刍动物和人类中引起爆发，并被疾病控制及预防中心(Centers for Disease Control and Prevention，CDC)和美国农业部(United States Department of Agriculture，USDA)归类为管制物质(select agent)和第三级危险病原体。

在反刍类牲畜中，裂谷热(RVF)特征在于在幼畜尤其是羔羊中的高死亡率、胎儿畸形和分布广泛的流产风暴；绵羊是最易受影响的，具有初生仔畜死亡率接近100％。人类感染的特征通常在于良性发热，但在小比例个体中可导致更严重的并发症，诸如视网膜炎、脑炎、神经疾患、肝坏死、或致死性出血热。尽管人类致死性出血病例已在历史上被评价为在感染的个体中的2％，但致死率已显著增加，在最近几年高达20％，包括在毛里塔尼亚的最近的爆发。

为了保护人类和动物健康，对用于人畜共患病原体包括RVFV的灵敏且安全的诊断性测试以及有效的疫苗存在日益增加的需求。RVFV越过其在非洲的传统的地方性流行界限至阿拉伯半岛的最近传播(Jupp和Cornet 1988,Abdo-Salem，等人，2011,Ikegami andMakino 2009)已导致对RVFV疫苗、快速诊断和相关的免疫试剂的增加的兴趣。

RVFV属于布尼亚病毒科(Bunyaviridae)中的白蛉病毒(Phlebovirus)属，所述布尼亚病毒科包括超过350种命名的分离株。其具有由小(S)、中(M)和大(L)RNA区段组成的负极性的三重单链RNA基因组。M区段编码两个结构性糖蛋白，Gn/Gc，78-kDa蛋白和非结构性蛋白NSm；且S区段编码核衣壳蛋白(N)蛋白和非结构性蛋白NSs。L区段编码RNA依赖性RNA聚合酶。N和L蛋白是病毒RNA合成所需的；且NSs蛋白是主要毒力因子并且已被证明通过广义转录下调包括抑制IFN-β和降解蛋白激酶R来抑制宿主转录免疫应答。NSm蛋白发挥抑制病毒诱导的凋亡的作用。糖蛋白Gn和Gc，是在病毒附着以引发感染中起作用的表面蛋白并已被证明携带引发中和抗体、保护性免疫的相关物的产生的表位。

核衣壳(N)蛋白是RVF病毒粒子的最丰富且高度免疫原性的组分并已被用于开发用于在人类和动物血清中检测RVFV特异性抗体的诊断性测定。尽管N蛋白被证明在布尼亚病毒科的成员间是高度保守的，先前的基于重组蛋白的间接ELISA未显示与其他非洲白蛉热病毒(Phleboviruses)的交叉反应性，所述交叉反应性可妨碍使用该蛋白在用于血清诊断RVFV感染的测定中的可靠性。然而，在来自美国和加拿大绵羊的某些血清中，N蛋白确实显示与未鉴定的物质(agent)的血清学交叉反应性。