[发明专利]抑制核糖体蛋白的胞内表达的小干扰RNA

说明书

技术领域

本发明涉及可结合到细胞中的核糖体蛋白的特定位点以特异地抑制核糖体蛋白表达的siRNA(小干扰RNA)。

背景技术

蛋白质参与从细胞信号转导到组织重塑乃至器官功能的所有生理过程。因此，细胞中的蛋白质的合成是非常重要的过程，并且核糖体执行此功能。核糖体是连接氨基酸以形成蛋白质的细胞器，并且是由核糖体蛋白和核糖体RNA所组成的大亚基。

rpS3(核糖体蛋白S3)是核糖体的一个组件，位于40S亚基的外表面并且与起始因子eIF2和eIF3交联。因为rpS3在N-末端区域具有核定位信号，据信rpS3的翻译功能是在细胞质中操作，并且修复功能是在细胞核中操作。除了其在核糖体功能中的作用，许多核糖体蛋白在复制、转录、RNA加工、DNA修复和恶性转化中具有次要作用。

rpS3基因位于人类染色体11q13.3-q13.5。具体地，报道称rpS3基因在结肠直肠癌患者中过表达。因此，rpS3基因产物在结肠直肠癌中过表达，并且非常可能与其它癌症相关联。此外，对区域11q13.3-q13.5的研究表明，常常会发生该基因的结构异常和扩增，并且该基因在人类癌症发展时过表达，所述癌症例如多发性内分泌肿瘤I型、乳腺癌或B细胞瘤(Pogue-Geile et al.,Mol.Cell.Biol.,11:3842-3849,1991)。

如本文所用，术语“siRNA(小干扰RNA)”是指约10个核苷酸至几十个核苷酸组成的、诱导RNAi(RNA干扰)的短双链RNA。RNA干扰(“RNAi”)是在许多真核生物中都保守的基因表达的转录后抑制方法，并且是指双链RNA被引入到细胞等中使得它能选择性地诱导靶基因的mRNA的降解或者能抑制靶基因表达的现象，所述双链RNA由具有与靶基因同源的序列的有义RNA和具有与该有义RNA互补的序列的反义RNA组成。RNAi是由存在于细胞中的短(即，少于30个核苷酸)的双链RNA(“dsRNA”)分子所诱导(Fire A.et al.,Nature,391:806-811,1998)。因为如上所述RNAi能够选择性地抑制靶基因的表达，它作为简单的基因敲除方法来替代基于低效同源重组的常规基因破坏方法吸引了相当大的注意。当siRNA被引入到细胞中时，具有与siRNA的核苷酸序列互补的靶基因的mRNA表达将被抑制。

siRNA与靶mRNA结合到RNA诱导的沉默复合物(“RISC”)，其裂解靶mRNA。siRNA显然是再循环的，其很像多周转酶，1个siRNA分子能够诱导约1000个mRNA分子裂解。因此，mRNA的siRNA介导的RNAi降解比目前可用于抑制靶基因表达的技术更有效。

然而，与最初期望的RNAi技术能够适用于所有基因的RNA以选择性抑制所述RNA的表达不同，最近已发现因为一些基因在高通量的RNAi筛选程序中是未知的，因此不能应用RNAi技术(Krueger et al.,Oligonucleotides,17:237-250,2007)。此外，在过去的几年里，已经开发出通过基于数据库的统计分析来预测siRNA序列的算法。然而，已知的是，因为计算算法不完善，并不是使用所述算法通过在计算机上的模拟方法(in silico method)确定的所有siRNA都能有效地抑制细胞中以及体内的靶mRNA，并且最有效的siRNA只能通过实验验证来确定(Derek et al.,Annu.Rev.Biomed.Eng.,8:377-402,2006)。

如上所述，理论上预测的siRNA不能有效抑制mRNA的能力，并且为实现治疗目的应发现高效的siRNA核苷酸序列。由于这个原因，非常重要的是找到对靶mRNA具有高抑制作用的特定的极度活跃的靶标。此外，需要通过基于每个基因的mRNA选择若干靶标位点来制备siRNA，并且至少在细胞水平上直接检查该siRNA的作用，识别具有优异的表达抑制效果的最佳序列。

因此，本发明人进行了广泛的努力来开发用于抑制核糖体蛋白S3(rpS3)表达的siRNA，并且结果是，构建了结合到rpS3的特定靶标位点的rpS3siRNA，并发现所构建的siRNA相对于商购的产品具有优异的抑制内源rpS3蛋白表达的效果，从而完成了本发明。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种特异性抑制rpS3表达的siRNA。

为了实现上述目的，本发明提供了用于抑制rpS3蛋白表达的siRNA，所述siRNA结合至对应于具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列的rpS3mRNA的位置777至795或796至914的核苷酸序列。