[发明专利]测定细胞标志物的试剂盒、装置及用途

说明书

技术领域

本发明属于测试或帮助检测食管中的表面异常的领域。

背景技术

食管癌(OAC)目前是全球第八个最常见的癌症类型且其发病率在过去的三十年中上升了近5倍。

巴雷特食管是发展至OAC过程中的第一步，且元测定表明巴雷特食管使每年发展至腺癌的风险增加0.12-0.5％。当正常的食管细胞被腺细胞代替时，产生巴雷特食管，且随时间推移，其可能发展成低度不典型增生(LGD)、高度发育不良(HGD)，并且最终发展成腺癌。

OAC和/或其癌变前的前兆Barrett食管的早期诊断可改善病人的管理和OAC的预后。在已知的一种方法中，已开发出Cytosponge^TM细胞收集装置，例如在WO 2011/058316中所公开的。

此外，Fitzgerald等人已开发出使用TFF3作为分子标记物的测试，并将其作为检测巴雷特食管的临床筛选工具，例如在US20120009597中所公开的。

使用Cytosponge^TM(BEST1)的首次研究(Kadri等人，2010)表明，Cytosponge^TM测试是在初级护理环境下诊断Barrett食管的可行方法。

在本系统中，有症状的患者被送去进行内镜检查。内镜检查是一种侵入性过程，其需要高度训练有素的医师。对于患者而言，这也是一个不舒服的过程且可能需要镇静。当内镜伴随有活检时，患者在此过程中还具有一定程度的风险。在临床环境中，这是目前检测巴雷特食管和/或巴雷特相关的发育不良或癌症的唯一途径。

Rugge等人(2010，Human Pathology，41卷，1380-1386页)公开了巴雷特癌变中的极光激酶A(AURKA)。值得注意的是，TP53突变被认为是巴雷特腺癌的风险增加的标记物。从Barrett食管的长区段获得食管活检样品。10 个巴雷特腺癌中有9个都显示了AURKA的免疫染色。通过mRNA测定和微阵列研究检测AURKA的表达。作者得出结论：AURKA的过表达在巴雷特黏膜发展至癌的进程中发挥显著作用。作者的结论是，在更大的前瞻性研究中，需要进行进一步尝试验证AURKA IHC的表达是巴雷特粘膜患者的潜在的预后标记物。

Liu等人(2008，World Journal of Gastroenterology，14卷，7199-7207页)公开了一种用于不同肿瘤中Tp53、C-myc、CCND1基因过表达的组织阵列。对七种不同的肿瘤类型进行了检查，并基于核酸进行测定。所用样品具有已知的肿瘤。未教导检测方法。样品被福尔马林固定。

Agnese等人(2007，European Society for Medical Oncology，8卷6增刊vill0-vill5)公开了极光-A的过表达作为回流相关的柱状粘膜和Barrett食管的早期标记物。作者在巴雷特黏膜(柱状排列的食管/CLO)以及具有或不具有发育不良和p53阳性免疫染色的Barrett食管(BO)之间未发现AURKA mRNA表达的任何统计学显著的数量差异。

已研究了某些与Barrett食管相关的分子标记物。这些标记物已在纯研究环境中进行了研究。这些研究已经在体外组织样品中进行。这些标记物单独研究。目前，还没有此类分子标记物用于任何的巴雷特相关的异常的临床测试。

本领域有必要改善巴雷特相关的异常的检测。现有的测试昂贵、费力、具有侵入性且对经历测试的受试者具有风险。

本发明试图克服与现有技术相关的问题。

发明概述

某些分子标记物已经证明与巴雷特相关异常有关。已在组织活检中研究了这些标记物。在组织活检上使用分子标记物在实践上几乎不优于当前用于活检形态学检查的临床金标准。这是因为，以这种方式研究标记物仍需要收集活检，从而仍具有与现有技术中侵入性过程相关的每个缺点。更重要的是，在研究环境中所研究的单一标记物已显示出灵敏度不足和/或特异性不足，从而不被认为是有助于检测或诊断的强效标记物。

本发明人研究了大量的候选标记物，还研究了这些标记物的不同组合。 本发明人已获得一个小且明确的标记物组，其在组合测试时获得了临床可用的灵敏度和特异性分数。此外，本发明人研究了这些标记物在表面取样的细胞中的表现。例如，这些标记物的组合可用于测定来自食管的表面采样所收集的细胞，例如使用细胞收集装置如Cytosponge^TM所获得的细胞。