[发明专利]用于植物基因表达的SB-UBI终止子序列

说明书

本专利申请要求提交于2013年2月18日的美国临时申请61/765900的权益，其全部内容以引用方式并入本文。

技术领域

本发明涉及植物分子生物学和植物基因工程领域。更具体地，其涉及用于调控植物基因表达的新型植物终止子序列及其应用。

背景技术

植物基因工程近来的进步已打开了工程化植物以具有改善的特性或性状的新的大门。这些转基因植物在其基因组中典型地具有重组DNA构建体，其具有可操作地连接至多个调控区的蛋白质编码区，该调控区使转基因准确的表达。在转基因植物中帮助调控基因表达的调控元件的一些例子为启动子、内含子、终止子、增强子和沉默子。

植物基因工程已发展至将多种性状导入商业上重要的植物中，也叫基因堆积。这是通过多基因转化实现的，其中多种基因被转化以产生可表达复合表型或多种表型的转基因植物。然而最优化地调节或控制每种转基因的表达是重要的。调控元件需要为多样的以避免引入相同的转基因植物重复序列，它们已经与对转基因表达和稳定性来说不期望的负面效应相关联(Peremarti等人，(2010)Plant Mol Biol 73：363-378；Mette等人，(1999)EMBO J 18：241-248；Mette等人，(2000)EMBO J 19：5194-5201；Mourrain等人，(2007)Planta 225：365-379，美国专利7632982，美国专利7491813，美国专利7674950，PCT专利申请PCT/US2009/046968)。因此，发现和表征能被用于在重要的农作物物种中表达异源性核酸的新型调控元件是重要的。各种不同的调控区能够被用于最优化地控制每种转基因的表达。

调控序列位于编码区的下游，编码区包含用于转录终止和3′mRNA加工的所需信号，并被称为终止子序列。该终止子序列在mRNA加工、定位、稳定性和翻译中起关键作用(Proudfoot，N.(2004)Curr.Op.Cell Biol 16：272-278.；Gilmartin，2005)。包含在终止子序列中的3′调控序列能够影响基因的表达水平。已经发现植物细胞中嵌合基因的优化表达依赖于合适的3′序列的存在(Ingelbrecht，I.L.W.等人(1989)Plant Cell 1：671-680)。通过基因的渗漏终止子的通读转录可导致从另一个基因的启动子的一个转基因的无益转录。转基因植物中转基因的双向、趋同转录也可由于分离的趋同基因的渗漏转录终止或来自基因组启动子而发生。趋同、重叠转录可降低转基因表达、或生成反义RNA(Bieri，S.等人(2002)Molecular Breeding 10：107-117)。这强调了发现新型和高效转录终止子的重要性。

发明内容

本发明涉及用于调控植物基因表达的调控序列。具体地，本发明涉及终止子序列。本发明提供了包含终止子序列的重组DNA构建体。

本发明的一个实施例是分离的多核苷酸序列，该分离的多核苷酸包含：(a)如SEQ ID NO：1所示的序列；(b)与SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性的序列；或(c)包含(a)或(b)的功能性片段的序列，其中所述分离的多核苷酸序列在植物细胞中作为终止子起作用。本发明的另一个实施例是包含分离的多核苷酸序列的重组构建体，该分离的多核苷酸序列包含：(a)如SEQ ID NO：1所示的序列；(b)与SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性的序列；或(c)包含(a)或(b)的功能性片段的序列，其中该分离的多核苷酸序列在植物细胞中作为终止子起作用。该重组构建体还可包含启动子和异源多核苷酸，其中启动子和异源多核苷酸可操作地连接至分离的多核苷酸序列，并且对于所关注的分离的多核苷酸来说是异源的。

本发明的另一个实施例是在植物中表达异源多核苷酸的方法，该方法包括以下步骤：(a)将上文所述的重组DNA构建体导入可再生的植物细胞；(b)从(a)的可再生的植物细胞再生转基因植物；以及(c)从步骤(b)的转基因植物获取子代植物，其中转基因植物和子代植物包含重组DNA构建体并表现出异源多核苷酸的表达。

在第四实施例中，本发明涉及包含重组DNA构建体的载体、细胞、植物、或种子，该重组DNA构建体包含本发明所述的终止子序列。