[发明专利]针对流感的多价融合蛋白疫苗

说明书

技术领域

本发明的实施方式涉及分子生物学、生物技术、制备生物化学、医学，并且可用于预防由现有流感毒株以及由可能的重排列引起的流感。

背景技术

术语“融合蛋白”指的是通过重组DNA分子的表达获得的蛋白质，其中数个不同基因的编码阵列结合至一个阅读框。

每年，流感病毒影响5％到15％的人口，引起急性呼吸道疾病。每一年，生产并广泛使用针对季节性流感的疫苗。然而，存在具有新的基因组合的某些流感病毒毒株的广泛传播的危险。这样的病毒可以是更具攻击性的并且引起更高水平的并发症和死亡率。在2009年，不利情况发生，其与高致病性流感病毒A(H1N1)pdm/09有关。疾病由具有新抗原决定簇的流感病毒引起。具体而言，专家担心这样的事实：新病毒是病毒的重排列，其在动物(猪)和人二者中传播。根据WHO，对于A(H1N1)pdm/09，与感染的人接触的人类的传染率为22％到33％。相比之下，季节性流感的模拟比率的范围为从5％到15％。

鉴于疫苗的开发，病毒表面蛋白血细胞凝集素(HA)是特别感兴趣的。HA负责病毒结合至细胞受体并且以这样的方式易感染疾病。HA的突变通常导致流行病学的和有时广泛流行的病毒潜能的增强。

正在针对病毒蛋白的抗原决定簇——表位开发B-细胞和T-细胞应答。针对病毒性感染即流感病毒的免疫——基于使用由病毒表位表示的氨基酸序列——显示对于针对病毒的免疫应答的开发大有希望并允许对于季节性感染发作和大流行病二者的预防创建通用疫苗。在一种构建体中使用不同病毒亚型的抗原决定簇使多价疫苗的生产更容易并允许创建针对新病毒毒株的有效疫苗。

创建通用疫苗是必要的，其将能够提供针对现有的和可能的重排列流感病毒毒株的防卫。基于重组蛋白的疫苗的使用允许避免甚至与灭活病毒的注射关联的风险。最近已经进行了许多尝试来创建这样的通用安全的疫苗。

存在这样的发明，根据该发明，编码禽流感病毒的多表位血细胞凝集素的基因在载体构建体内使用，用于在植物中生产重组多表位疫苗(RU 2008139004 A,01.10.2008)。在专利申请US 2009106864(2009)和RU 2008139004中，作者使用A型禽流感病毒血细胞凝集素的共有序列，最优化密码子用于在植物中表达。在专利申请JP2009102416(2009)中，作者在昆虫细胞中使用杆状病毒构建体，用于表达A型和B型流感病毒的血细胞凝集素。这些方法的缺点是使用来自仅一种流感病毒亚型(H5N1)的蛋白(血细胞凝集素)序列。这使疫苗活性谱变窄。而且，与在大肠杆菌中的表达相比，在植物和昆虫细胞中的表达提供更低的蛋白产率。

已知数种融合多肽，其包括与包含五种免疫显性的抗原表位的A型流感病毒的表面HA-蛋白具有高同源性百分比的序列(RU 92004487,10.12.1992)。这些多肽的建议应用中的一种是提供针对相应抗原的疫苗，用于治疗和预防(包括免疫治疗方法)以防被这类抗原感染。然而，没有规定使用哪种亚型的血细胞凝集素。在开发通用疫苗的过程中，也应当考虑B型流感病毒的血细胞凝集素的抗原决定簇，因为疫苗的免疫原性由其序列被使用的毒株限制。

已知多价流感疫苗包含多价抗流感抗原、佐剂、提供疫苗渗透的药剂和可接受的赋形剂(CN101450209,31.12.2008)。由H1-H16和N1-N9表示的抗原称为抗原组分。还已知多价流感疫苗，其由表面病毒蛋白A/H1N1、A/H3N2、B型血细胞凝集素(CN101524538,26.03.2009)、佐剂-甘油或氢氧化铝组成。融合构建体中可接受的佐剂和抗原决定簇二者的使用以及使用单一蛋白类型——血细胞凝集素将允许疫苗的生产简单化并降低生产成本，因为将不再必要调整条件和控制组分生产的质量。

已知基于灭活病毒的多价疫苗。活性组分由抗原A/H1N1、H3N2、B、H5N1和A(H1N1)pdm/09表示(CN101732711,31.12.2009)。列举的抗原从灭活病毒提取，这意味着疫苗的规模扩大的生产可以被与病毒尤其是流感病毒的使用关联的可能的问题所限制。例如，必须创建适合的工作条件以处理容易传播的高度致病的病毒毒株。而且，列举的抗原为单独的蛋白质，在上面列举了使用融合构建体的优点。