[发明专利]用于分离微囊泡的方法有效
| 申请号： | 201480002901.2 | 申请日： | 2014-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN105026911B | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | D.恩德尔;A.拉马钱德兰;H.颜;E.伯格霍夫;T-F.魏;M.内尔霍尔姆;J.K.O.斯科格 | 申请（专利权）人： | 外来体诊断公司 |
| 主分类号： | G01N1/18 | 分类号： | G01N1/18;A61K48/00;A61K9/14 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 杜艳玲;杨思捷 |
| 地址： | 美国*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微囊泡 生物样品 提取核酸 | ||
1.一种用于从生物样品中提取核酸的方法，其包括：
(a) 提供生物样品；
(b) 在足以使微囊泡级分保留在捕获表面之上或其中的条件下，使所述生物样品与捕获表面接触，其中所述捕获表面包含带正电的并且由季铵R-CH2-N+(CH3)3官能化的三个膜，其中所述三个膜彼此直接邻近；
(c) 在所述微囊泡处于所述捕获表面之上或其中时，裂解所述微囊泡级分；和
(d) 从所述微囊泡级分中提取核酸。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述膜是强化型稳定纤维素膜。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述三个膜的每一个具有至少3 um的孔径。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述膜具有在3-5 um范围内的孔径。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述三个膜彼此相同。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述生物样品是血浆、血清、尿、脑脊髓液或细胞培养物上清液。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述步骤(a) 进一步包括使所述生物样品与装载缓冲液接触。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述装载缓冲液具有中性pH。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述核酸是RNA。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述RNA是mRNA、miRNA或其组合。
11.一种用于从生物样品中提取核酸的方法，其包括：
(a) 提供生物样品；
(b) 在足以使微囊泡级分保留在捕获表面之上或其中的条件下，使所述生物样品与捕获表面接触，其中所述捕获表面包含带正电的并且由季铵R-CH2-N+(CH3)3官能化的三个膜，其中所述三个膜彼此直接邻近；
(c) 从所述捕获表面洗脱所述微囊泡，以获得微囊泡级分；和
(d) 从所述微囊泡级分中提取核酸。
12.如权利要求11所述的方法，其中来自步骤(c) 的所述洗脱的微囊泡级分通过旋转浓缩器进行浓缩，以获得浓缩的微囊泡级分，并且其中从所述浓缩的微囊泡级分中提取核酸。
13.如权利要求11所述的方法，其中所述三个膜的每一个包含再生纤维素。
14.如权利要求11所述的方法，其中所述三个膜的每一个具有至少3 um的孔径。
15.如权利要求11所述的方法，其中所述膜具有在3-5 um范围内的孔径。
16.如权利要求11所述的方法，其中所述三个膜彼此相同。
17.如权利要求11所述的方法，其中所述生物样品是血浆、血清、尿、脑脊髓液或细胞培养物上清液。
18.如权利要求11所述的方法，其中所述步骤(a) 进一步包括使所述生物样品与装载缓冲液接触。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述装载缓冲液具有中性pH。
20.如权利要求11所述的方法，其中所述核酸是RNA。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述RNA是mRNA、miRNA或其组合。
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