[发明专利]一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法，属于卫生检测技术领域。

背景技术

随着工农业的迅速发展，含有各种有毒有害有机物水进入天然水体，使我国的水源水及饮用水受到不同程度的污染，水体污染事件[1]不断发生，如2005年松花江重大水污染事件，2010年洞庭湖水污染事件等，据国家环境部门统计，我国82%的河流受到不同程度的污染，大部分河段不适合作饮用水源，导致了严重的饮用水供应危机，受到各国政府和公众高度重视，成为当今世界重大的公共卫生问题之一，研究表明，水体中有机提取物能够通过长期积累达到危害人类及其他生物的水平，干扰神经系统、免疫系统、生殖系统等，导致组织器官的病变，鉴于人类实际接触途径，探讨管网末梢水对人体的健康危害具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是：提供一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法，能快速检测有机污染物致大鼠肝肾功能及免疫功能，得到准确的测定值，以克服现有技术的不足。

本发明的技术方案

一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法，该方法利用固相萃取法提取有机污染物，对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，分别采用酶偶联速率法法检测、苦味酸法和透射比浊法检测大鼠体内尿素氮、肌酐和免疫球蛋白，以达到快速明显检测大鼠肝脏肝肾功能及免疫功能损伤过程。

前述的一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法中，大鼠选取40只，雌雄各半，体重80～100g，染毒前适应性饲养1周，自由进食饮水，在染毒期间，清洁级动物房相对湿度为50%～70%，温度为23±2℃。

前述的一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法中，采用固相萃取法富集水中有机污染物，萃取剂为XAD-2树脂，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇，水样过柱流速为4倍柱体积/min，过柱完后依次用3倍柱体积的二氧甲烷和甲醇先后洗柱，流速0.1倍柱体积/min，洗脱液经旋转蒸发仪25℃减压蒸馏挥干，将已挥干的浓缩提取物用玉米油定容至50L/ml（母液）-20OC冰箱保存备用。

由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，由于谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)是存在于肝细胞内的酶，当肝细胞膜受损就会被释放入血，血清AST、ALT异常间接提示肝细胞受损，血清中的CHE是由肝脏合成的水解酶，其活性水平是评估肝实质细胞损害的重要手段，也可以作为判断病情程度和预后的一项临床指标，实验结果显示：血清中ALT、AST、CHE水平随着染毒剂量的升高而明显上升，中高剂量组与对照组比较差异具有统计学意义。

具体实施方式

下面对本发明进一步的详细说明，但不作为对本发明的任何限制。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验动物

健康清洁级成年大鼠40只，体重155±18g，由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供，SCXK(渝)2007-0005。染毒前适应性饲养一周，自由进食饮水。清洁级动物房相对湿度45%-75%，温度控制在22±3℃。

2.1.2 主要试剂

葡萄糖测定试剂盒（北京首医临床医学科技中心）、肌酐测定试剂盒（北京九强公司）、尿素氮试剂盒、谷草转氨酶测定试剂盒、谷氨转氨酶测定试剂盒总蛋白测定试剂盒、白蛋白测定试剂盒、球蛋白测定试剂盒，均来自厦门英科创科技有限公司，血清总胆红素试剂盒、间接胆红素试剂测定盒、结合胆红素测定试剂盒、胆碱酯酶试剂测定盒、碱性磷酸酶试剂盒、胆固醇测定试剂盒、甘油三脂测定试剂盒、免疫球蛋白（IgM、IgA、IgA)试剂盒、补体（C3、C4) 试剂盒，均来自中生北控生物科技股份有限公司。XAD-2大孔树脂(20-60目,美国Sigma公司,)、甲醇、二氯甲烷，均为分析纯(美国TEDIA公司)、玉米油(美国Sigma公司)、生理盐水、0.9%戊巴比妥钠(美国Sigma公司)。

2.1.3 主要仪器

1/‰电子天平（中国奥豪斯公司）、索氏提取器(索氏管+冷凝管+1000ml烧瓶)、旋转蒸发仪（RE-3000，上海亚英生化仪器有限公司）、循环水式多用真空泵（SHB-Ⅲ，郑州长城科工贸有限公司）、离心机（LD4-2，北京医用离心机厂）、全自动生化分析仪(AU400,OLYMPUS有限公司)

2.2 方法

2.2.1 水样采集与处理