[发明专利]一种用于100个以内细胞的蛋白质组自动化分析系统及方法

权利要求书

1.一种用于100个以内细胞的蛋白质组自动化分析系统，其特征在于，以一个可切换的十通阀为中心，与注射泵、多元梯度泵、质谱仪、上样泵、毛细管道连接组成；十通阀的内部通道直径为50-250微米；其中，十通阀的第一位置与注射针及注射泵连接，第二位置与毛细管连接作为完整细胞与酶混合溶液的进液口，第三位置和第十位置之间连接体积为1-5微升的毛细管，作为细胞的酶解样品环；第位置四和第位置七之间连接肽段的捕集柱；第位置五连接液相色谱的多元梯度泵；第位置六连接质谱仪；第位置八连接废液出口；第位置九连接上样泵。

2.根据权利要求1所述的蛋白质组自动化分析系统，其特征在于，所述的肽段捕集柱的结构为：在5-20cm长、20-75微米内径的毛细管中采用溶胶-凝胶法制作双柱塞，双柱塞中间填入3-10毫米长的C8或C18填料。

3.一种基于权利要求1或2所述自动化分析系统的蛋白质组分析方法，其特征在于具体步骤如下：

（1）把细胞培养收集之后，用PBS稀释成10-100个/μL的浓度，加入碳酸氢铵、盐酸胍和胰蛋白酶后配制成细胞酶解液，精确计数，并且根据计数结果确定进样体积；

（2）使用注射泵将细胞酶解液吸入十通阀上的样品环内，切换十通阀的位置，使样品环两端封闭，置于柱温箱或水浴中，37℃～50℃的温度下保持1～4小时；期间对样品环超声振荡若干次，完成酶解；

（3）切换十通阀的位置，使样品环一端与上样泵相连，一端与捕集柱相连，通过上样泵的推动，将肽段富集在捕集柱上，并进行除盐纯化；

（4）切换十通阀的位置，利用多元梯度泵的梯度将肽段逐步洗脱，在毛细管反相色谱柱上分离，并且使用质谱仪完成对肽段的检测。

4.根据权利要求3所述的蛋白质组分析方法，其特征在于所述细胞酶解液配方为：在分散于PBS缓冲液中的细胞液内加入20-100mM的碳酸氢铵，50-500mM的盐酸胍，1-10ng/μL的胰蛋白酶。