[发明专利]一种肌酸激酶同工酶检测试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种涉及生物试剂，具体涉及一种检测试剂，尤其涉及一种肌酸激酶同工酶检测试剂。

背景技术

肌酸激酶(Creatine Kinase, CK) (ATP: Creatine N-phosphotransferase EC 2.7.3.2)通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、腺嘌呤核苷三磷酸 （ATP）再生有直接关系的重要激酶1,2，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。肌酸激酶有四种同功酶形式：肌肉型(MM)、脑型(BB)、杂化型(MB)和线粒体型(MiMi)。MM型主要存在于各种肌肉细胞中，BB型主要存在于脑细胞中，MB型主要存在于心肌细胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。肌肉型肌酸激酶分子是由两个相同的亚基组成的二聚体。根据目前已经测定的兔、人、鸡、鼠肌酸激酶的一级结构，M型亚基由387个氨基酸残基组成，质量为43 KDa左右，分子内有8个巯基，但无二硫键。大熊猫肌肉型肌酸激酶也是二聚体酶，每个亚基由376个氨基酸残基组成，分子量为42 KDa。

血清CK-MB测定的最重要意义在于诊断急性心肌梗塞。急性心肌梗塞胸痛发作后4-6小时，病人血清CK-MB先于总活性开始升高，12-36小时达峰值；多在72小时内恢复正常。其最高值达对照组4.9-22倍以上。如果梗塞后3-4天，CK-MB仍持续不降，表明心肌梗塞仍在继续进行，如果已下降的CK-MB再次升高则提示原梗塞部位病变扩展或有新的梗塞病灶；如果胸痛患者在48小时内尚未出现CK-MB升高，或小于总活性的2，即可排除急性心肌梗塞的诊断。临床上常以CK-MB超过CK总活性的3（离子交换柱层析法)或10（免疫抑制法)作为急性心肌梗塞的诊断依据。

用CK-MB诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是CK-MB的绝对活性或占总活性百分率的界限值，均不适用于14岁以下的儿童，因为婴幼儿和儿童的CK-MB均高于成人。各种类型的心脏手术后有可能引起血清CK-MB活性增强，在并发术间或术后心肌梗塞时升高更为显著。

CK-MB由CK-M和CK-B亚单位组成。抗CK-M抗体完全抑制了CK-MM（肌酸激酶的主要活性部分）和CK-MB中的CK-M亚单位的活性。再检测CK的活力为余下的CK-B的活力，相当于一半CK-MB活力。所以将结果乘以2即为CK-MB的活力。CK-M活力检测反应如下：

                                                

整个试剂包含两个主体试剂，分别为R1和R2，其中R1中含有CK-M抗体，能够完全抑制CK-M亚单位酶的活性，利用CK-B催化产生ATP的效果，通过一连串反应，最终在340nm的波长检测NADH的含量，获得CK-MB的酶活力。常规的试剂检测时经常因为样本中存在的丙酮酸、肝素等干扰物，影响检测结果的准确性，同时试剂中抗CK-M抗体在试剂中不稳定，造成试剂稳定性较差，进而影响了试剂在市场上的应用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种准确度高、稳定性好、抗干扰性强的肌酸激酶同工酶检测试剂。

一种肌酸激酶同工酶检测试剂由试剂R1和试剂R2，按照体积比4：1的比例组成的；

所述的，试剂R1是由以下含量的成分组成的：

咪唑缓冲液                                50-100mmo1

葡萄糖                                    20-45mmo1

纳米粒子                                  20-40mmol

N-乙酰半胱氨酸                            20-30mmo1 

乙二胺四乙酸钠                            1-8mmo1

腺苷二磷酸                                1-10mmo1

辅酶Ⅰ                                    2-6mmo1

核糖核苷酸                                10-25mmo1

丙酮酸脱羧酶                              0.5-2KU

6-磷酸葡萄糖脱氢酶                         2-5KU