[发明专利]一种长牡蛎白介素IL17N重组蛋白及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种长牡蛎白介素IL17N重组蛋白及其制备和应用。

背景技术

白介素17是高等动物中一类重要的炎症细胞因子，在机体免疫调节系统中发挥着重要的作用，目前已在高等哺乳动物中发现了五大类白介素亚家族成员，其中IL17A及IL17F的功能研究的比较清楚，其他成员的功能还有待进一步的研究。白介素17可以上调免疫相关基因的表达，加速体内病原的清除。白介素17的失调会造成机体的许多炎症反应以及自身免疫性疾病，诸如牛皮癣，风湿性关节炎及脑脊髓炎等。

目前研究发现白介素17存在于肿瘤组织中，对肿瘤组织的微环境起到了调节作用。高等动物中白介素17对肿瘤组织起到了双重作用，一方面可以通过激活细胞毒性T细胞、自然杀伤细胞等对肿瘤起到抑制的作用，另一方面白介素17可以激活IL6和STAT3信号通路，诱导VEGF及TGF-β的表达，利于肿瘤细胞的转移和生长。

贝类是我国重要的海水养殖生物，近年来养殖贝类病害频发，对我国海水养殖业造成重大的经济损失。从贝类自身的免疫防御系统入手，阐明其白介素17等细胞因子的分子功能及其对机体的免疫调节作用，将为病害防治和良种选育提供新思路。由于贝类进化地位较原始，其分子功能分化不完全，同一个蛋白往往兼具多种生物学功能，因此贝类的功能基因具有诱人的开发利用潜力。

发明内容

本发明目的在于提供一种长牡蛎白介素IL17N重组蛋白及其制备和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种长牡蛎白介素IL17N重组蛋白，长牡蛎白介素IL17N重组蛋白为序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示。

一种长牡蛎白介素IL17N基因重组蛋白的制备方法，

(1)以长牡蛎白介素基因编码区为模板，采用P1和P2引物进行PCR扩增，待用；

(2)上述PCR扩增产物与pMD19-T Simple载体通过T4连接酶连接，转化，测序鉴定重组子；

(3)采用NdeI、BamHI对上述的重组子及pMAL-C5X进行酶切,酶切片段通过T4连接酶连接，转化，测序鉴定重组子；

(4)将上述构建重组子转入Transetta DE3表达菌株中进行诱导培养，而后纯化，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白IL17N；

所述引物P1和P2分别为：

P1：5’-GACATATGATGAATGCCCCTGTCTGGCT-3’；

P2：5’-GAGGATCCTTAGCTGGGTCTCTGGACGG-3’。

一种长牡蛎IL17N基因重组蛋白的应用，所述序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示的重组蛋白IL17N用于制备抑菌剂或饲料添加剂。

所述序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示的重组蛋白IL17N用于制备抑制革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌的的抑菌剂。

一种长牡蛎IL17N基因重组蛋白的应用，所述序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示的重组蛋白IL17N用于制备抗肿瘤的药物。

所述序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示的重组蛋白IL17N用于制备抗小鼠肺纤维瘤细胞的药物。

本发明所具有的优点：

本发明利用体外重组表达技术获得了长牡蛎白介素IL17N重组蛋白，该重组蛋白能抑制大肠杆菌和藤黄微球菌的生长，并对小鼠肺纤维瘤细胞L929具有明显的杀伤作用。同时在开发广谱抗菌类药物、饲料添加剂和抗肿瘤药物等方面具有潜在应用价值。

附图说明

图1为本发明实施例提供的长牡蛎IL17N基因重组蛋白对小鼠肺纤维瘤细胞L929生长的抑制作用图。

图2为本发明实施例提供的长牡蛎IL17N基因重组蛋白对大肠杆菌和藤黄微球菌生长的抑制作用图。

具体实施方式

下面的实验例中将对本发明作进一步的阐述，但本发明不限于此。

实施例1

长牡蛎IL17N基因编码区的体外原核重组表达，包括下列步骤：

1、重组载体的构建

本发明中采用的重组载体为NEB公司的pMAL-C5X原核表达载体。