[发明专利]一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液

说明书

技术领域

本发明涉及TMB显色液领域，具体地，涉及一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液。

背景技术

  TMB是一种过氧化物酶底物，用于ELISA反应。底物产生一种可溶性淡蓝色的末端产物，可在370或635nm在分光光度计上读取。其适用于酶联免疫反应中的显色阶段的定量和定性分析。其检验的原理是：当标记在抗体或抗原上的酶与显色液中的TMB、双氧水等反应，加入终止液后溶液由无色变成黄色，黄色深浅反应ELISA体系中抗原抗体结合的多少，从而判断某种抗原或抗体的多少。在通过酶标仪测度吸光值，判断免疫反应的程度。

现有市售的酶联免疫试剂盒所采用TMB显色剂液大多为双组份，分A液和B液，使用之前需要先混匀，在使用上存在缺点一是不够方便，二是在包装材料上存在成本提高和资源浪费；三是使用中的混合过程容易造成批间质量不均一；四是还存在稳定性差、保存时间短、显色背景高、灵敏度低等的缺点，市售的酶联免疫试剂盒也有采用单组份的TMB显色液，但是现有的单组份TMB显色液的稳定性不是不是特别好。

现有技术的TMB显色液及其制备方法，由A液和B液等体积混合后得到，所述A液各组分的摩尔浓度为：柠檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氢二钠0.01-0.5mol/L，过氧化氢0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括TMB、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的摩尔浓度为0.1-1mmol/L，所述HCl的摩尔浓度为0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1-10%；现有的单组份TMB显色液的氧化剂为过氧化脲。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，以克服现有显色液操作麻烦、稳定性差的问题。

此外，本发明还包括上述单组份TMB显色液的应用。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是：一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMSO，每1000mL所述氧化效果好的单组份TMB显色液中还包括EDTA1-3g。

现有的TMB显色液一般都是由A液和B液混合得到，A液各组分的摩尔浓度为：柠檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氢二钠0.01-0.5mol/L，过氧化氢0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括TMB、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的摩尔浓度为0.1-1mmol/L，所述HCl的摩尔浓度为0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1-10%，现有TMB显色剂的缺点在于A、B两种液体在显色之前需要等体积混匀，操作不方便、耗时间、效率较低、批此之间存在差异，同时成本也高，且A液B液自混合的过程中，HCl会挥发，会导致显色的有效成分的浓度发生改变，因而会导致混合后的TMB显色液的在显色过程中的灵敏度降低；本发明为单组份TMB显色液，避免了TMB显色液在使用之间需要将A、B液混合的操作步骤，简化操作流程，减少了操作时间，提高了效率，同时避免了因A、B液不同批次间的差异导致混合的显色剂的显色效果；不会存在因HCl挥发导致的TMB显色液的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了TMB显色液的灵敏度；并且，本发明在TMB显色液中加入加入了1-3g的EDTA，实验证明，EDTA的加入提高了TMB显色液的稳定性；本发明用过硼酸钠替代现有的过氧化氢、过氧化脲，实验证明，与过氧化氢、过氧化脲相比，过硼酸钠具有更好的氧化性；本发明将传统溶剂乙醇替换成DMSO，DMSO为一种极性非质子溶剂，具有较好的渗透性，能与有机溶剂、水互溶，因此，DMSO能加快TMB的溶解，使之溶解的更充分，且使溶解后的溶液更稳定。

进一步地，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。

实验证明，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g的TMB显色液具有更好的稳定性。

进一步地，DMSO为20-30mL。20-30mL的DMSO具有较快的溶解速度，溶解的更充分，稳定性更好。

进一步地，TMB的质量设置为10-30mg。将TMB的质量设置为10-30mg能有效的提高显色效果，提高显色的灵敏度。

一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液的应用，将所述的单组份TMB显色液应用到酶联免疫试剂盒。

综上，本发明的有益效果是：