[发明专利]耐热碱性木聚糖酶基因xylGT优化序列及其高效表达方法有效
| 申请号： | 201410679215.0 | 申请日： | 2014-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN104450758B | 公开（公告）日： | 2018-02-23 |
| 发明（设计）人： | 闫达中 | 申请（专利权）人： | 武汉轻工大学;桂林精成生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/81;C12N9/42 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 430023 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 耐热 碱性 聚糖 基因 xylgt 优化 序列 及其 高效 表达 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种高效表达耐热碱性木聚糖酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将耐热碱性木聚糖酶基因xylGT核苷酸优化序列插入到表达载体pPIC9K的表达位点，经连接得到重组质粒pPIC9K-xylGT，所述耐热碱性木聚糖酶基因xylGT核苷酸优化序列如SEQ ID NO.1所示；
步骤二、将经SalⅠ酶切线性化后的pPIC9K-xylGT重组质粒电转化到毕赤酵母宿主菌GS115中，在基本培养基平板上初步筛选到阳性菌落，通过PCR进一步鉴定筛选得到重组工程菌GS115/xyl；根据G418抗性筛选出高拷贝的阳性转化子，再将高拷贝的阳性转化子转移到含有0.05％木聚糖的缓冲甲醇培养基平板上,挑选产水解圈大的阳性转化子作为高产木聚糖酶的出发菌；
步骤三、在摇瓶培养基础上进行发酵产酶，发酵产酶条件为：pH＝6.9、大豆蛋白胨为1.5％、酵母浸膏为15g/L、甲醇为12mL/L、硫酸镁为0.1％、硫酸钙1.049g/L、硫酸铵为0.45％，于28℃培养5天；
步骤四、确定发酵产生的酶的最适作用条件：pH为8.8，反应温度为78℃。
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