[发明专利]一种分泌抗金刚烷胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种分泌抗金刚烷胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

金刚烷胺可以抑制病毒繁殖，临床上用于预防和治疗各种A型流感病毒的感染。但由于经济利益驱使和疫病防控的压力，我国目前家禽饲养中存在滥用金刚烷胺的现象。金刚烷胺的残留蓄积会对食用者产生嗜睡、失眠、眩晕、抑郁、恶心等症状；长期使用还将使禽流感等病毒产生耐药性，诱导产生新型耐药病毒。

然而，2012年11月媒体曝出国内养殖的“速生鸡”从孵出到端上餐桌只需45天，不法商贩为了保证其存活，给鸡喂养了大剂量人用药物来抑制禽类的禽流感等病症。2012年12月，央视调查中称，一些养殖户为进一步缩短养殖周期，让原本已经是速成品种的白羽鸡长得更快，偷偷喂食违禁药物，其中包括金刚烷胺等抗病毒药品和地塞米松等激素类药品。“速成鸡”事件的爆发引发了全国消费者对禽肉食品安全的广泛关注和担忧，对建立快速、灵敏、准确的检测技术提出了迫切需求。

目前，对金刚烷胺的检测主要依靠高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、薄层色谱法(TLC)、质谱法(MS)等，但是存在仪器昂贵，检测费时的缺陷，并且需要专业技术人员进行操作，不能达到现代检测对快速、准确的要求。

免疫分析法可以弥补以上所有缺点，免疫分析法是一种利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质(药物、激素、蛋白质、微生物等)的分析方法，建立小分子化合物的免疫分析方法的关键是能够制造出对小分子化合物具有高亲和力和高特异性的抗体。近年来，美国已开发了用于检测金刚烷胺的酶联免疫试剂盒，但检测成本较高，操作相对复杂。

杂交瘤技术能有效制备单克隆抗体，其原理是利用聚乙二醇为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测、筛选和单个细胞培养(克隆化)，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。将这种杂交瘤细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。

杂交瘤技术制备单克隆抗体的核心是获得理想的杂交瘤细胞株，但现有技术中还未有能分泌抗金刚烷胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

发明内容

本发明提供了一种分泌抗金刚烷胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株能产生高效价的抗金刚烷胺单克隆抗体。

一种分泌抗金刚烷胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为杂交瘤细胞株7G4.3，已于2014年9月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.C2014169；中国典型培养物保藏中心的地址为：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心(武汉大学第一附属小学对面)。

本发明采用小剂量肌肉注射免疫方法和腹腔免疫相结合的方法，利用金刚烷胺人工抗原注射小鼠，获得免疫的小鼠脾细胞，进而将免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，从而获得所述杂交瘤细胞株。

金刚烷胺本身的分子量太小，不具有免疫原性，即缺乏T细胞表位而无法直接诱导动物机体产生特异性抗体，因此本发明对金刚烷胺进行化学修饰，获得能诱导B细胞的增殖和分化继而产生特异性抗体的金刚烷胺人工抗原。所述金刚烷胺人工抗原的分子结构式如式(Ⅰ)所示：

式(Ⅰ)中，BGG为牛丙种球蛋白。

每次注射时，金刚烷胺人工抗原的用量为10μg。

采用小剂量肌肉注射免疫方法和腹腔免疫相结合的方法免疫小鼠，免疫效价高。

本发明还提供了所述杂交瘤细胞株在制备金刚烷胺检测试剂盒中的应用；提供了所述杂交瘤细胞株在制备用于检测金刚烷胺的试纸条中的应用。

将所述杂交瘤细胞株扩大培养，接种于小鼠腹腔，在小鼠腹腔积液中可得到高效价的抗金刚烷胺单克隆抗体，利用该抗金刚烷胺单克隆抗体可用于制备金刚烷胺检测试剂盒。

本发明还提供了一种抗金刚烷胺单克隆抗体，由所述杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。

本发明还提供了所述抗金刚烷胺单克隆抗体在检测金刚烷胺中的应用。

本发明还提供了一种金刚烷胺的检测试剂盒，含有所述的抗金刚烷胺单克隆抗体。