[发明专利]一种肌钙蛋白的检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种肌钙蛋白的检测方法及试剂盒，尤其涉及一种肌钙蛋白的双波长荧光免疫层析检测方法及其检测试剂盒。

背景技术

心脑血管疾病是威胁人类生命健康的第一类重大疾病。根据世界卫生组织最新统计，全球每年有1670万人死于各类心脑血管疾病，这一数字占所有疾病死亡的29.2％，其中有一半以上死于急性心肌梗死(AMI)。近10年来，我国急性心肌梗死的患病率、发病率及其危险因素水平均呈明显上升趋势，已接近国际平均水平。因此，只有做到早预防、早发现及早救治，才能最大限度的防止致残、致死后果，最大限度的改善心血管患者的预后和生活质量。

由于AMI的症状多种多样，合并症多在临床存在着相当大的误诊及漏诊，有一些已经存在的心肌损伤因为不典型的发作被医生及患者忽视，没有及时的进行治疗出现了再次发作危及生命。鉴于AMI发病急、死亡率高的特点，以及AMI的早期诊断和及时治疗对于降低AMI死亡率的重要性，研制出一种灵敏度高、特异性好、临床诊断符合率高、检测快捷方便的急性心肌梗塞检测方法成为急性心肌梗塞临床诊断的发展方向。

近年来，临床化学家们逐渐将诊断AMI的研究重点转移到心肌蛋白标志物上，其中心肌肌钙蛋白(cTn)是唯一存在于心肌中的收缩蛋白，对心肌坏死具有高度的敏感性和特异性。肌钙蛋白是由三个结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白I(cTnI)和肌钙蛋白C(cTnC)。心肌中的T和I亚基结构不同于其他肌肉组织，由于分子量小，发病后在血液中的浓度将迅速升高。经国际临床化学及实验室联合会(IFCC)和欧洲心脏病协会(ESC)证明：cTnI和cTnT在临床诊断中，cTnI比cTnT特异性更高。其原理是cTnT与骨骼肌肌钙蛋白有交叉反应，且在肾脏损伤时也有无法解释的cTnT升高现象。因而，cTnI是唯一存在心肌细胞中迄今为止诊断AMI灵敏度和特异性最高的血清生化指标,被广泛地研究作为心肌损伤的确定性标志物,正成为当今诊断AMI的“金标准”。正常人血液中cTnI的含量一般低于0.4ng/mL，在AMI发生后，cTnI可在6-8小时内快速升高，在18-24小时内达到峰值，升高倍数可达30-200倍，可持续10-15天才恢复正常，即cTnI具有出现时间早和在血液中持续时间长的优点，可作为AMI早期诊断指标，已经被证实为心肌损伤最特异、最敏感的血清标志物之一。

现有的cTnI检测方法主要有酶联免疫吸附法，化学发光法和胶体金免疫分析法。ELISA的最低检测灵敏度可达到0.2ng/mL，但操作复杂，需经严格训练的专业人员完成，且检测耗时长，达5-6小时；化学发光法是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的微量抗原或抗体的标记免疫分析技术，其灵敏度高达0.03ng/mL，检测时间也较短，约1-2小时，但需要采用专用大型设备，对技术要求高，不易在临床实验室中进行常规开展；胶体金免疫层析法虽然具有样品用量少，简便快速，便宜的优势，然而当遇到某些样品中目标分析物含量较低时，胶体金的颜色将很浅，很难用肉眼来判断结果，容易出现误判，灵敏度低。

中国专利公布号为CN102192986B的发明专利，虽然公布了一种纳米胶体免疫层析法检测肌钙蛋白的方法，采用表层引入胺基、羧基、羟基等功能基团的有机硅包裹纳米金微粒与抗体反应，形成稳定的共价键进行抗体的标记，取代传统胶体金用于免疫反应，制备免疫试剂。然而表面功能化的有机硅包裹的纳米金微粒的制备工艺较复杂，生产成本高；检测限只有0.4ng/ml，不能满足一部分患者的需要；采用肉眼分辨容易出现误判；检测纳米金微粒对光的散射容易出现灵敏度低，定量不准确等缺点。中国专利公布号为CN102565422B的发明专利，虽然公布了一种荧光免疫层析法检测肌钙蛋白的试剂盒，利用量子点的优良荧光特性，结合双色标记技术进行荧光定量检测。然而其对复杂血样中易产生荧光信号的物质并未进行消除，在一些成分复杂样品中易产生假阳信号。中国专利公布号为CN102539784B的发明专利，虽然公布了一种免疫比浊法检测肌钙蛋白，将抗体组合物与聚苯乙烯胶乳微粒进行偶联，与待检样本中相应抗原发生免疫反应形成聚集颗粒，测定其浊度即可得出cTnI的含量。然而其检测易受到脂血等浑浊血清的影响，容易出现定量不准确；检测需要生化分析仪，仪器较贵，除了需要专用人员操作，还需要专门的场地来放置仪器，操作过程较复杂，检测时间也较长。

有鉴于上述的缺陷，本设计人，积极加以研究创新，以期创设一种灵敏度高、准确度高、操作简单、成本低的检测方法及试剂盒，使其更具有产业上的利用价值。

发明内容