[发明专利]一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法

权利要求书

1.一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法，其特征在于：所述方法具体步骤如下：

(1)将TPP-DMAE溶解于二甲基亚砜中，得到浓度为1×10^-2mol/L的溶液a；向溶液a中加入DMEM培养基，得到TPP-DMAE的浓度为1×10^-5mol/L的溶液b；

其中，TPP-DMAE为4,4',4″-(1H-吡咯-1,2,5-三基)三苯甲酸(2-二甲氨基)乙酯的简写，TPP-DMAE的结构式如下：

(2)将癌细胞传代至培养皿中；将装有癌细胞的培养皿置于培养箱中培养20～24h，洗涤，向培养皿中依次加入相同体积的溶液b和DMEM培养基，得到待测样品1；将待测样品1置于培养箱中培养5～10min，吸出液体，洗涤，向培养皿中加入固定剂，静置5～10min，洗涤，加入缓冲液，得到含有失活细胞的待测样品2；

(3)测试待测样品1中癌细胞和待测样品2中失活细胞的荧光强度；

其中，测试待测样品1中癌细胞的荧光强度的测试方法为每间隔1h测试一次，共测试6～10次，其中，第一次的测试结果记为癌细胞的初始荧光强度；

待测样品2中失活细胞的荧光强度的测试方法为：首先，测试待测样品2中失活细胞的初始荧光强度；随后向待测样品2中通入CO₂气体，或CO₂与空气体积比为1:1的混合气体，测试通入气体后待测样品2中失活细胞的荧光强度，共通入气体20～40次，每次气体的通入量相等；

(4)根据步骤(3)待测样品1中癌细胞和待测样品2中失活细胞的荧光强度的测试结果计算癌细胞产生的CO₂含量，具体为：

首先，根据测试结果绘制待测样品1中癌细胞荧光强度变化率随时间t的变化曲线，得到曲线一；绘制待测样品2中失活细胞通入气体后的荧光强度变化率随通入气体体积的变化曲线，得到曲线二；两条曲线中的荧光变化率相同时，分别得到曲线一中对应的时间t和曲线二中对应的通入气体的体积v；所述体积v中含有二氧化碳气体的体积即为癌细胞在时间t内自身新陈代谢产生的CO₂的体积。

2.根据权利要求1所述的一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法，其特征在于：步骤(1)所述DMEM培养基为高糖DMEM培养基。

3.根据权利要求1所述的一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法，其特征在于：步骤(2)所述癌细胞为子宫颈癌细胞、乳腺癌细胞中的一种；所述培养皿为激光共聚焦显微镜用培养皿；所述培养参数为温度37℃，CO₂体积含量5％。

4.根据权利要求1所述的一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法，其特征在于：步骤(2)所述洗涤采用pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，洗涤次数为三次。

5.根据权利要求1所述的一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法，其特征在于：步骤(2)所述溶液b的体积为0.1-1.0mL；固定剂为质量百分比为4％的多聚甲醛溶液，固定剂的添加量为1mL；缓冲液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法，其特征在于：步骤(3)所述成像情况和荧光强度均采用激光共聚焦显微镜。

7.根据权利要求1所述的一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法，其特征在于：步骤(3)所述待测样品2与每次通入的气体的体积比为1000:1。

8.根据权利要求1所述的一种定量检测癌细胞呼出二氧化碳含量的方法，其特征在于：步骤(4)所述待测样品1中癌细胞荧光强度变化率＝(I_i-I₀)/I₀，I₀表示癌细胞的初始荧光强度，I_i表示第i次检测时癌细胞的荧光强度，i为1～9的正整数；

测样品2中失活细胞荧光强度变化率＝(I′_k-I′₀)/I′₀，I′₀表示失活细胞的初始荧光强度，I′_k表示第k次通入气体后失活细胞的荧光强度，k为1～40的正整数。