[发明专利]一种能够提高非酶糖基化反应抑制率的蜜环菌发酵液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，尤其是涉及一种能够提高非酶糖基化反应抑制率的蜜环菌的发酵方法。

背景技术

蜜环菌属于担子菌亚门、担子菌纲、伞菌目、白蘑科蜜环菌属真菌，是一种食药兼用的真菌，子实体及菌丝都可入药，具有疏风活络、强筋壮骨、明目等生理活性，民间常被用于治疗癫痫、腰腿疼痛、佝偻病等。

近年来，随着我国经济的持续发展和人民生活水平的迅速提高，糖尿病及其相关的慢性并发症的发病率也在逐年上升，糖尿病所引起的并发症包括糖尿病肾病、视网膜病变、糖尿病周围神经病变、牙周病和动脉粥样硬化等，已成为严重威胁人民健康和生命的常见病和多发病。在引起糖尿病及其慢性并发症的诸多因素中，蛋白质非酶糖基化反应是重要因素之一。因此，如何有效抑制非酶糖基化反应而达到防治糖尿病及其并发症是研究者们近年来关注的热点。

非酶糖基化反应是指由蛋白质、氨基酸等的游离氨基端与还原糖的羰基通过一系列复杂的非酶促反应，最终生成不可逆的糖基化终末产物的过程。非酶糖基化反应不仅参与了糖尿病的发生与发展，还与阿尔茨海默症、微血管病变等多种糖尿病并发症蜜切相关。目前用于治疗非酶糖基化反应的药物主要包括合成药物和中药及食药用菌抑制剂。食药用真菌在自然界分布广泛且资源丰富，多种食药用真菌已被证实具有抑制非酶糖基化的活性，因此可用于治疗糖尿病及其并发症的重要来源。

液体深层发酵是利用微生物合成生物产品的主要方式，一般的蜜环菌液态发酵采用的发酵条件是在发酵起始便确定发酵温度直至发酵结束，但发酵温度对蜜环菌菌体的生长和具有生物活性的产物的影响不同，因此限制了蜜环菌发酵液抑制非酶糖基化反应的能力。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一种能够提高非酶糖基化反应抑制率的蜜环菌发酵液的制备方法。本发明显著提升了蜜环菌发酵液对非酶糖基化反应的抑制率，为提高其他微生物发酵液的生物活性提供了一种新的方法，同时也为蜜环菌在发酵工业上的应用开发出一种新方向。

本发明的技术方案如下：

一种能够提高非酶糖基化反应抑制率的蜜环菌发酵液的制备方法，包括以下步骤：

(1)斜面培养：将蜜环菌接种于斜面培养基上，在30℃下培养至菌丝体长满斜面；

(2)种子液的培养：将斜面中生长的蜜环菌菌体接种到种子培养基中，在30℃、摇床转速150转/分钟的条件下培养7天；

(3)将蜜环菌种子液以4％的接种量接种到发酵培养基中，在28～32℃、摇床转速150转/分钟的条件下发酵培养2～4天；

(4)调整摇床的温度，在22～25℃、摇床转速150转/分钟的条件下，继续发酵培养3～5天。

所述的斜面培养基的配方为葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、马铃薯200g/L、VB110×10^-3g/L，用自来水配置，121℃灭菌15min。

所述的种子培养基的配方为麸皮15g/L、玉米粉20g/L、葡萄糖20g/L、MgSO₄1g/L，KH₂PO₄2g/L、酵母膏3g/L、VB115×10^-3g/L，用自来水配置，pH自然，121℃灭菌15min。

所述的发酵培养基的配方为麸皮15g/L、玉米粉15g/L、葡萄糖20g/L、MgSO₄1g/L，KH₂PO₄2g/L，用自来水配置，pH自然，121℃灭菌15min。

优选的，步骤(3)的发酵温度为29℃，发酵培养时间为3天，步骤(4)的发酵温度为24℃，发酵培养时间为4天。

本发明有益的技术效果在于：

本发明的基于温度分段控制的发酵策略，通过调控发酵温度，在不同时期分别满足蜜环菌菌体生长和生物活性产物合成，最终提高了蜜环菌发酵液对非酶糖基化反应的抑制率。本发明可以显著提升蜜环菌发酵液对非酶糖基化反应的抑制率，简单实用，便于批量自动化生产，具有广阔的应用前景，为蜜环菌抑制非酶糖基化的研究作出重要的贡献。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

其中，非酶糖基化反应抑制率(NEG)的测定方法如下：