[发明专利]一种草乌甲素的高效提取分离方法

权利要求书

1.一种草乌甲素的高效提取分离方法，包括以下步骤：

(1)前处理：取草乌药材，去除杂质，粉碎成粗粉；

(2)浸提、浓缩：取草乌药材粗粉，置圆底烧瓶中，加入含硫酸3‰的酸性75％乙醇溶液提取三次，第一次提取：在草乌药材粗粉中加入为草乌药材粗粉重量3.2倍重量的所述含硫酸3‰的酸性75％乙醇溶液，控制蒸汽压力0.1MPa，加热至60℃保温浸提12小时，过滤，收集滤液；第二、三次采用与第一次同样的方法分别在每次的滤渣中加入为滤渣重量2.4倍重量的所述含硫酸3‰的酸性75％乙醇溶液，分别提取2～4小时，过滤，收集滤液，合并三次提取液滤，在0.02～0.04MPa真空浓缩回收至无醇味，浓缩液加入为浓缩液重量1.5倍重量纯化水稀释至相对密度为1.05～1.07；

(3)酸化、碱化：在步骤(2)稀释至相对密度为1.05～1.07的稀释液中加入10％稀硫酸调pH至2，静置24小时，过滤，滤液在搅拌下缓缓加入浓氨水调pH至8，静置24小时，过滤，滤液备用；

(4)萃取：将步骤(3)碱化的滤液注入分液漏斗，加入为所述碱化的滤液体积1.6～2倍体积的乙酸乙酯，搅拌萃取30min～45min，静置2～3小时，分离上层乙酸乙酯萃取液，下层水液按上述萃取方法操作，重复萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液；将合并的乙酸乙酯萃取液在0.02～0.04MPa真空浓缩，控制温度在60℃±5℃，浓缩回收乙酸乙酯至稠膏状，收集稠膏，在稠膏中加入为所述稠膏重量10倍重量纯化水充分搅匀，搅拌下加入浓度为10％的稀硫酸溶液调pH至2使稠膏完全溶解，静置12小时，过滤，滤液在搅拌下缓缓加入浓氨水调pH至8.5～9，使沉淀完全，静置12小时，过滤，沉淀用纯化水洗至pH呈中性，收集沉淀，即得草乌总碱；草乌总碱用乙酸乙酯溶解后，加入为草乌总碱重量0.6～1.2倍重量硅胶混合均匀，干燥控制水分≤15％，装入洁净容器中，密封；

(5)柱层析：硅胶柱层析，用石油醚：乙酸乙酯：三乙胺的体积比＝4:1:0.075的溶剂系统进行洗脱，控制流速13～20ml/min，通过薄层色谱检识观察洗脱情况，分段收集含草乌甲素的洗脱液，合并所述洗脱液；

(6)结晶：用旋转蒸发仪0.02～0.04MPa真空浓缩合并的洗脱液，温度60℃±5℃，即得草乌甲素粗品结晶；将草乌甲素粗品置圆底烧瓶中，加入为草乌甲素粗品重量4倍重量的乙酸乙酯使草乌甲素粗品充分溶解，在0.02～0.04MPa真空浓缩至1/3体积，用石油醚边加边振摇至晶体析出，静置使结晶完全，过滤，再用石油醚洗涤结晶至颜色成均一的白色结晶，干燥，即为草乌甲素纯品；

以上步骤中所述的百分数为质量分数，所述的千分数为质量分数。