[发明专利]从白刺种子中提取分离L-色氨酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及L-色氨酸的分离提取方法。 

背景技术

唐古特白刺(Nitraria Tangutorum Bobr)为蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺属植物，是一种药食两用的植物，主要生长在荒漠或半荒漠地区。唐古特白刺所具有的耐干旱、耐盐碱、抗沙埋等特性使得其成为防风固沙、保持水土、改良土壤等不可多得的灌木品种。唐古特白刺在《中药大辞典》中被称为卡密，以果熟时采收，晒干入药，具有健脾胃。滋补强壮、调经活血的功能，主治身体瘦弱、气血两亏、脾胃不和、消化不良、月经不调、虚寒腰痛等症。《本草纲目》中记述，白刺“气味辛、寒、无毒。主治心绞痛、痈肿溃脓，止痛。疗丈夫虚损，阳瘘精自出，补肾气，益精髓等”。在民间唐古特白刺的果实还被于哺乳期妇女的日常饮食中，促进泌乳。研究表明白刺果实中含花色苷、总多酚、多糖、氨基酸、维生素、黄酮、生物碱、矿物质元素等成分，具有显著的降血糖、降血脂、调节免疫、抗疲劳、耐寒冷、抗氧化、延缓衰老、保肝作用、抗肿瘤抗癌等生物活性。 

为了深度开发利用白刺，中国专利201010298758.x公开了一种从白刺果实中提取分离色氨酸的方法，它是将白刺果实压榨后，去除籽皮，取果汁过陶瓷膜除杂后，上大孔吸附树脂柱，依次用水、40％～100％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，超滤后即可得到色氨酸。该方法中弃去了种子和水洗脱液。 

目前还未见采用大孔吸附树脂从白刺种子中提取分离L-色氨酸的方法。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种从白刺种子中分离提取L-色氨酸的方法。 

本发明研究发现，从白刺种子中提取分离L-色氨酸的方法，它包括如下操作步骤： 

(1)取白刺种子，以乙醇或含水乙醇为溶剂进行提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩，以石油醚萃取，收集水层； 

(2)取步骤(1)收集的水层，过大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得L-色氨酸粗品； 

(3)取L-色氨酸粗品，纯化，即得L-色氨酸纯品。 

进一步地，步骤(1)中，所述含水乙醇浓度为60％～90％。 

更进一步地，步骤(1)中，所述含水乙醇浓度为70％～80％，优选为75％。 

进一步地，步骤(1)中，提取温度为50～80℃，优选为60℃。 

进一步地，步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂或弱极性大孔吸附树脂。 

更近一步地，步骤(2)中，所述非极性大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂，HPD100，HPD300，HP-10，X-5；所述弱极性大孔吸附树脂为AB-8型大孔吸附树脂。 

进一步地，水洗脱的具体操作为：用水洗脱19个柱体积，收集第7～19个柱体积的水洗脱液。本发明研究发现，采用上述洗脱方式，即可得到纯度90％以上的L-色氨酸。 

本发明一个具体实施方式中，大孔树脂柱规格为：直径5厘米，柱高1.2米。 

进一步地，步骤(3)中，所述纯化采用制备液相色谱法或半制备液相色谱法。 

其中，所述半制备液相色谱法中，检测波长为254nm，以甲醇-水为流动相，梯度条件如下：0-10min，10％甲醇；10-20min，10％-15％甲醇；20-30min，15％甲醇；30-50min，15％-20％甲醇；50-55min，20％-95％甲醇；55-65min，95％甲醇。 

进一步地，所述半制备液相色谱法中，色谱柱为20*250mm的C18柱。 

中国专利201010298758.x中，虽然是以白刺果汁为原料进行了色氨酸的提取，然而，其大孔树脂纯化步骤中收集的是40％～100％乙醇洗脱部位，水洗部位被弃去了；令人意想不到的是，本发明研究发现，以白刺种子为原料，对大孔树脂直接进行水洗后，就分离提取得到了高纯度的L-色氨酸粗品和L-色氨酸纯品。由此可见，本发明使用的洗脱部位与现有专利技术完全不同，其洗脱工艺仅需要水洗液，其操作更简便，成本更为低廉，同时也为白刺种子的开发利用提供了新的选择。 

另外，相比目前其他色氨酸硅胶、凝胶柱层析工艺而言，本发明仅仅只使用大孔树脂，操作简便，并且洗脱液无需使用有机溶剂，工艺更为环保，安全性更高。 

附图说明

图1大孔树脂直接洗脱产物的液相色谱图，液相条件：0-30min10％-45％B，流动相A：水B：甲醇(分析时所用检测波长是254nm) 

图2半制备液相色谱图，主峰为L-色氨酸(制备色谱中所用检测波长是254nm)