[发明专利]一种鹿茸草悬浮细胞培养的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及鹿茸草悬浮细胞培养的快繁方法，属于生物技术领域。

背景技术

鹿茸草，Monochasma sheareri Maxim.ex Franch. et Savat.，玄参科，别名：千年艾，千重塔，瓶儿蜈蚣草等，多年生草本植物，主根木质化，茎多数，密集丛生，全体多少呈绿色，下部被少量绵毛，节间极短，有短柔毛或无毛，叶交互对生，有时互生，茎下部叶鳞片状，因节间短而互相盖迭呈覆瓦状，向上渐大，条形或条状披针形，花单生于茎上部叶腋，呈总状花序，子房长卵形，花柱顶端弯曲，柱头头状，蒴果卵形，为宿萼所包被，室背开裂，种子多数，扁椭圆形，分布于山东、江苏、安徽、浙江、江西、湖北等地，生于低山多沙山地及草丛中。全草：苦，凉。清热解毒，凉血止血，用于咳嗽，吐血，赤痢，带下，牙龈炎，乳腺炎，疖肿。目前鹿茸草尚未见人工繁殖。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是鹿茸草悬浮细胞培养的繁殖方法，本发明方法所制备的鹿茸草悬浮培养增长率高，生长稳定，为药用资源的开发利用提供了更直接的途径。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化汞处理6min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26℃，诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.3-0.5mg/L+KT0.2-0.3mg/L+L-谷氨酰胺6-8mmol/L+草酸钠50-100mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照时间14h/d，温度26℃。

采用本发明制备的鹿茸草细胞增殖率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化汞处理6min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26℃，诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.3mg/L+KT0.2mg/L+L-谷氨酰胺6mmol/L+草酸钠50mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照时间14h/d，温度26℃，悬浮细胞增长率56%。

实施例2

取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化汞处理6min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26℃，诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.5mg/L+KT0.3mg/L+L-谷氨酰胺8mmol/L+草酸钠100mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照时间14h/d，温度26℃，悬浮细胞增长率57%。

实施例3

取鹿茸草叶片，擦拭干净，在洗衣粉中浸泡4min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化汞处理6min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的叶片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培养基中进行愈伤组织诱导，附加5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度26℃，诱导出来的愈伤组织接入培养基VR+ZT0.4mg/L+KT0.3mg/L+L-谷氨酰胺7mmol/L+草酸钠100mg/L中进行悬浮细胞培养，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照时间14h/d，温度26℃，悬浮细胞增长率58%。