[发明专利]快速高效获得无菌哺乳动物的方法

说明书

本发明提供一种快速高效获得无菌哺乳动物的方法，包括：a).获得雄性哺乳动物的精子并使所得精子获能；b).获得雌性哺乳动物的卵子；c).利用步骤a)获得的精子与步骤b)获得的卵子制备受精卵；d).获得无精雄性哺乳动物；e).制备假孕雌性哺乳动物；f).利用步骤c)获得的受精卵制备胚胎；g).获得含有步骤f)所得胚胎的假孕雌性哺乳动物；和h).无菌培养步骤g)获得的雌性哺乳动物，得到无菌哺乳动物。该方法具备时间短、见效快、效率高、饲养群体小的优点，从而能快速高效地提供无菌哺乳动物用于各种用途。

技术领域

本发明涉及实验动物科学领域。具体地说，本发明涉及一种快速高效获得无菌哺乳动物的方法以及所获得的无菌哺乳动物的用途。

背景技术

随着医学和生物学的迅猛发展，作为生命科学支撑条件的实验动物学也得到了前所未有的重视，不但实验动物学研究内容进一步拓展、加深；而且对于高级别的实验动物的需求也越来越多，要求越来越严格。从普通级别实验动物的被取消，到清洁级动物，无特定病原体动物(Specific pathogen-free animal,SPF)的大量需求，再到无菌动物包括各种已知微生物的实验动物(悉生动物)，为生命科学的研究的精细化、数量化、稳定可重复性提供了支撑。

然而，各种高级别的实验动物必须饲养在特定的SPF屏障系统中，而无菌动物饲养的条件更加严格，稍有不慎很容易感染细菌病毒，即使是非致病菌，也造成了微生物等级的下滑。低级别的实验动物必须通过环境消毒配合生物净化的手段来重新获得高级别实验动物。

传统的生物净化为剖腹取胎，即将待净化的动物交配怀孕，等到接近临盆的时候，剖腹，连同子宫和胎儿通过净化药液进入隔离手术操作器内，剖开子宫取出胎儿，待胎儿能自由呼吸后传送给带奶母鼠，哺乳到断奶。这种传统的剖腹取胎的方式的缺点在于：1、当发生大规模污染时，不能尽快的恢复较大的种群，需要时间间隔较长；2、剖腹取胎容易造成剖腹过程中仔鼠死亡，主要由于仔鼠肺部不能及时张开自主呼吸；3、剖腹取胎的仔鼠容易被带奶母鼠吃仔，因为带奶母鼠天然的母性，会将不是自己所生的仔鼠咬死，甚至吃仔。

现有技术中虽然也有一些其它替代方法，但对于最高级别的实验动物-无菌动物而言，这些方法依然存在存活率低(不足50％)、净化所需要时间周期长(60天左右)、种群大(制备代乳母鼠的雌鼠及与之交配的雄鼠；需要生物净化的雌鼠及与之交配的雄鼠)等缺陷。

因此，本领域急需一种快速、高效、简便而且成功率高的无菌哺乳动物制备方法，从而能够用于生物学或医学研究工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速、高效、简便而且成功率高地制备无菌哺乳动物的制备方法，以及采用本发明方法制备得到无菌哺乳动物作为标准实验动物的用途。

在第一方面，本发明提供一种无菌哺乳动物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

a).获得雄性哺乳动物的精子并使所得精子获能；

b).获得雌性哺乳动物的卵子；

c).利用步骤a)获得的精子与步骤b)获得的卵子制备受精卵；

d).获得无精雄性哺乳动物；

e).制备假孕雌性哺乳动物；

f).利用步骤c)获得的受精卵制备胚胎；

g).获得含有步骤f)所得胚胎的假孕雌性哺乳动物；和

h).无菌培养步骤g)获得的雌性哺乳动物，得到无菌哺乳动物。

在优选的实施方式中，步骤d)、e)和f)在36℃-37℃的温度以及45％-70％的湿度下进行。

在优选的实施方式中，步骤d)、e)和f)在36.5℃-37℃的温度以及50％-60％的湿度下进行。