[发明专利]一种细胞裂解方法在审
| 申请号： | 201410525904.6 | 申请日： | 2014-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN105441421A | 公开（公告）日： | 2016-03-30 |
| 发明（设计）人： | 袁玉梅;李飞达;刘欢;刘楚新;李超;王俊 | 申请（专利权）人： | 深圳华大基因研究院;深圳华大基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋;杨晞 |
| 地址： | 518083 广东省深圳市*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 裂解 方法 | ||
1.一种细胞裂解方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)将待测细胞与细胞裂解液按比例进行混合；所述细胞裂解液包括Tris-HCl、EDTA和蛋白酶K；
(2)将步骤(1)所得混合物在30℃～70℃孵育5～30min，然后在92-98℃变性8～12min。
2.如权利要求1所述的细胞裂解方法，其特征在于，步骤(1)中，所述细胞裂解液包括≤100mM的Tris-HCl、≤30mM的EDTA和≤300μg/ml的蛋白酶K，其pH为7.6-8.4；
优选地，所述细胞裂解液包括10mM的Tris-HCl、10mM的EDTA和100μg/ml的蛋白酶K，其pH为7.8-8.2；
进一步优选地，所述细胞裂解液包括10mM的Tris-HCl、10mM的EDTA和100μg/ml的蛋白酶K，其pH为8.0。
3.如权利要求1或2所述的细胞裂解方法，其特征在于，步骤(1)中，待测细胞与细胞裂解液的混合比例为800000-1500000个细胞/ml裂解液，优选为1000000个细胞/ml裂解液。
4.如权利要求1或2所述的细胞裂解方法，其特征在于，步骤(2)中，所述孵育为在40℃～60℃孵育5～30min，优选在55℃孵育5min。
5.如权利要求1或2所述的细胞裂解方法，其特征在于，步骤(2)中，所述变性为在94-96℃变性8～12min，优选在95℃变性10min。
6.如权利要求1或2所述的细胞裂解方法，其特征在于，所述待测细胞为动物细胞；
优选地，所述待测细胞为猪、小鼠或人类的各种细胞。
7.一种用细胞裂解物直接进行PCR的方法，其特征在于，使用如权利要求1-6任一项所述的细胞裂解方法裂解细胞，将所得细胞裂解物加入反应体系中直接进行PCR。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，每个PCR反应体系中使用500～60000个细胞的裂解产物，优选使用4000～30000个细胞的裂解产物，更优选使用20000个细胞的裂解产物。
9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述PCR反应程序如下：
98℃，30s；(98℃，10s；60℃，20s；72℃，30s～2min；)×30～35个循环；72℃，10min；16℃，2min。
10.如权利要求1-6任一项所述的细胞裂解方法或如权利要求7-9任一项所述的方法在转基因动物细胞检测中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于深圳华大基因研究院;深圳华大基因科技有限公司，未经深圳华大基因研究院;深圳华大基因科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410525904.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
