[发明专利]同时提取白腐真菌复合吸附剂中SOD、CAT、NADH氧化酶和ATP的方法

说明书

技术领域

本发明涉及环境微生物技术领域，尤其涉及一种同时提取白腐真菌复合吸附剂中SOD、CAT、NADH氧化酶和ATP的方法。

背景技术

水中重金属离子的污染备受关注，生物吸附是一种有效去除水中重金属离子的方法。包埋白腐真菌的复合吸附剂对水中重金属离子，例如Cd²⁺、Pb²⁺、Cr⁶⁺等有很强的去除效果，重金属离子对复合吸附剂微生物有毒害作用，同时微生物对重金属离子有一定的耐受性，这与复合吸附剂的微生物的抗氧化机制和磷酸氧化机制有关。

SOD和CAT是生物体内内源性抗氧化防御系统中的主要酶，它们与自由基之间处于一种动态平衡，当细胞处于应激状态下，体内氧化磷酸化作用增强，从而产生足够的能量维持生命需要，但同时也导致了自由基的产生增多，导致脂质出现氧化损伤。如果测定的SOD和CAT活性升高，说明它们清除氧自由基的能力增强，即减少自由基带来的氧化损伤。

NADH氧化酶是细胞中重要的氧代谢酶，它能够清除细胞内氧毒性，帮助细胞抗击外界氧压力，对于维持细胞内氧平衡具有重要作用。ATP用于储存能量，当细胞需要能量时，ATP分解释放能量。当ATP的含量增大时，说明细胞需要的能量增多，此时通过调节呼吸链和氧化磷酸化反应来增加ATP的含量，满足细胞的供能需要。

目前有用粉碎-浸提-离心分离-超滤-浓缩-离心喷雾干燥的方法提取植物中SOD，用CO₂超临界萃取法提取动物肝脏中CAT，用离心、超声破碎法和渗透压冲击法破碎细胞提取细菌中FMN-NADH氧化还原酶，几种传统的微生物体内ATP的提取方法有加热、超声、酸、氯仿等。由于提取SOD、CAT、NADH氧化酶和ATP的方法不尽相同，而且提取的方法复杂，要同时提取复合吸附剂的微生物SOD、CAT、NADH氧化酶和ATP就有困难。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种重金属胁迫下同时提取白腐真菌复合吸附剂中SOD、CAT、NADH氧化酶和ATP的方法，具有简单、便捷、有效、可靠等优势，其中SOD、CAT、NADH氧化酶的酶活力和ATP含量随重金属离子浓度的变化，可应用于废水中重金属的处理。

为解决上述技术问题，本发明提供一种同时提取白腐真菌复合吸附剂中SOD、CAT、NADH氧化酶和ATP的方法，包括以下步骤：

S1、将白腐真菌复合吸附剂加入CaCl₂溶液中制成包埋白腐真菌的小球，将包埋白腐真菌的小球进行恒温振荡培养得到培养液；

S2、向培养液中加入Cd²⁺进行胁迫培养，然后取出包埋白腐真菌的小球，进行液氮研磨得到研磨样品；

S3、将研磨样品中加入磷酸缓冲液，冰浴下超声处理，离心得到SOD、CAT、NADH氧化酶和ATP的复合物。

进一步的，前述白腐真菌复合吸附剂包括氮修饰的二氧化钛、海藻酸钠溶液、白腐真菌孢子悬浮液。

进一步的，前述白腐真菌孢子悬浮液为为黄孢原毛平革菌孢子液，每mL黄孢原毛平革菌孢子悬浮液含孢子1.0×10⁶个，前述海藻酸钠溶液中海藻酸钠的含量为2wt％。

进一步的，前述氮修饰的二氧化钛与前述2wt％的海藻酸钠、黄孢原毛平革菌孢子液的质量体积比为2g∶100ml∶100ml。

进一步的，前述S1步骤具体为：制备包埋包腐真菌的小球，然后将小球加到Kirk无机培养基中进行恒温振荡培养。

进一步的，前述振荡速度为150rpm，前述培养温度为37℃，前述培养时间为72h。

进一步的，前述S2步骤中前述Cd²⁺在前述培养液中的浓度为0.1～0.7mmol/L。

进一步的，前述S2步骤中前述胁迫培养的时间为12～14h。

进一步的，前述S3步骤中前述超声处理的功率为400w～600w，总时间3min～5min，单次超声持续时间为2s～4s，单次超声间隔时间为8s～12s。

本发明的创新点在于：