[发明专利]体液中乳糖测定方法

权利要求书

1.一种体液中乳糖测定方法，其特征在于工具酶及指示酶同在试剂I中，试剂II中仅有乳糖酶有效成分；其测定方法为：体液中葡萄糖先与试剂Ⅰ于37℃温浴3～5分钟，体液中葡萄糖与试剂Ⅰ的反应生成NADPH，加入试剂Ⅱ后于37℃温浴4～7分钟，乳糖水解后生成L-半乳糖和葡萄糖，葡萄糖经反应也生成NADPH；仪器在334～340nm波长处检测，以试剂Ⅰ反应产生的NADPH为空白，由试剂Ⅱ反应产生的NADPH计算出乳糖的含量，计算公式为：

OD_乳糖 = OD₂ - OD₁×[（SV+R₁V₁ ）/ (SV+R₁V₁ +R₂V₂)]

乳糖浓度= F×OD_乳糖

其中OD_乳糖是乳糖产生的吸光度，OD₁是样品加入试剂Ⅰ反应后测得的吸光度，OD₂反应液加入试剂Ⅱ反应后测得的吸光度，SV是样品的体积，R₁V₁是试剂Ⅰ的体积，R₂V₂是试剂Ⅱ的体积，F是校正因数。

2.根据权利要求1所述的体液中乳糖测定方法，其特征在于试剂Ⅰ中含有三磷酸腺苷、己糖激酶、NADP、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；试剂Ⅱ中仅含有乳糖酶有效成分。

3.根据权利要求1所述的体液中乳糖测定方法，其特征在于试剂Ⅰ每升三乙醇胺盐酸缓冲液内含三乙醇胺30 mmol～70 mmol、硫酸镁1.0  mmol～3.0 mmol、三磷酸腺苷2.0 mmol～4.0 mmol、NADP 2.0 mmol～4.0 mmol、己糖激酶 6000U～10000U、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶10000U～20000U、Proclin-300防腐剂100μl～300μl；试剂Ⅱ每升三乙醇胺盐酸缓冲液内含三乙醇胺30 mmol～70 mmol、乳糖酶1500～2500U、Proclin-300防腐剂100μl～300μl。

4.根据权利要求1所述的体液中乳糖测定方法，其特征在于试剂Ⅰ和试剂Ⅱ中三乙醇胺盐酸缓冲液的pH值为7.5±0.2。

5.根据权利要求1所述的体液中乳糖的测定方法，其特征在于测定的体积比为： 样品∶试剂I∶试剂II=1∶60～90∶20～30。