[发明专利]一种用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇富集净化的固相萃取柱

说明书

技术领域

本发明涉及农产品安全检测技术领域，具体地说涉及一种用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇富集净化的固相萃取柱。

背景技术

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)，又称呕吐毒素，属于单端孢霉烯族类化合物，是雪腐镰刀菌烯醇的一种脱氧衍生物，主要由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)在霉变的农作物中产生。DON具有很强的细胞毒性、免疫毒性和胚胎毒性，对血液系统、中枢系统、消化系统及钙磷代谢也有严重的影响，并具有一定的致畸作用。此外，研究表明，DON可能是一种潜在的弱的致癌剂。多种食用农产品及其加工品如小麦、大麦、玉米等在其保存、运输过程中非常容易遭受DON的污染，造成巨大的经济损失，2011年我国最新的国家标准GB2761-2011规定玉米及其制品(玉米渣、玉米片、玉米面)、小麦、大麦、麦片、小麦粉中DON的限量为1000μg/kg。由于农产品基质复杂多样，容易造成基质干扰，所以前处理的富集净化对于农产品中DON的检测分析至关重要；另外，DON属于产毒真菌的次级代谢产物，极难通过人工合成途径获得，获得大量DON标准品最简单有效得方法就是将产毒菌接种在大米培养基，获得高含量的DON大米基质，然后分离纯化。由于基质中含有的大量色素、鞣质等杂质，利用简单吸附净化的方法很难去除，如果直接将基质提取液进中压制备色谱分离纯化，将大大缩短制备柱的使用寿命，所以对DON富集净化十分必要。本发明固相萃取净化柱不仅能除去提取液中的色素、油脂、鞣质等对色谱柱有严重损害的杂质，还能对样品中微量的DON毒素实验富集，提高了检测分析方法的灵敏度，为农产品中DON的风险评估奠定基础。

传统的DON净化方法通常是使用液液萃取或者层析柱来进行净化，但是，此方法操作复杂，耗时耗力，且产生了大量的废弃物，对环境产生较大破坏。固相萃取SPE(Solide Phase Extraction)是一种基于色谱分离的样品前处理方法，利用吸附剂将液体样品中的特定化合物吸附，与样品的基质和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离或者富集目标化合物的目的，从而大大提高工作效率，提高灵敏度和准确度，达到既定量准确又快速简便的要求，但是由于商品化的固相萃取柱其价格昂贵，单支价格超过15元，不适合大量样品的检测及标准物质的制备工作，极大地限制了其应用的普遍性。目前，尚缺乏操作简单、价格低廉的能够用于DON富集、净化的前处理固相柱。

发明内容

本发明首先提供了一种用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇富集净化的固相萃取柱中的装填材料，该装填材料由硅胶、中性氧化铝和弗罗里硅土组成；

其中硅胶、中性氧化铝和弗罗里硅土的重量比为0.5-2：0.1-1：0.1-1。

本发明还提供一种用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇富集净化的固相萃取柱，其包括萃取容器、上述装填材料以及筛板；

其中装填材料在萃取容器内，筛板在装填材料上部；

萃取容器内下部还有容器内筛板。

所述的萃取容器可为下层带筛板的聚丙烯固相萃取空管；

其中装填材料中的硅胶、中性氧化铝和弗罗里硅土可分三层叠放，也可以混合；分三层叠放时，三层没有特定的顺序要求，可以依次从上到下分别为硅胶层、中性氧化铝层和弗罗里硅土层，也可以依次从下到上分别为硅胶层、中性氧化铝层和弗罗里硅土层。

具体的说，本发明的一种用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇富集净化的固相萃取柱，其包括萃取容器、硅胶层、中性氧化铝层、弗罗里硅土层和筛板，如图2。

本发明利用硅胶、中性氧化铝、弗罗里硅土研制了一种简便、高效、经济的装填材料，利用该装填材料制备的用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇富集净化的固相萃取柱，可以用以除去鞣质、色素等干扰物，提高了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)检测分析方法的灵敏度，可满足农产品中DON的痕量检测分析。本发明建立的固相萃取柱具有很高的回收率(90.5±1.8％、98.4±2.1％、106.9±4.4％)和灵敏度(采用液相色谱串联质谱法分析后，灵敏度均低于10μg/kg)的同时，制作更加简单、使用方便，单支固相萃取柱的成本不超过5元，且操作简单，满足了国内外DON检测及标准品制备前处理的要求。

附图说明

图1脱氧雪腐镰刀菌烯醇富集净化的固相萃取柱简略图

图2一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇富集净化的固相萃取柱

图3a对照溶液组UPLC-PDA全扫描图

图3b过柱溶液组UPLC-PDA全扫描图