[发明专利]一种同型半胱氨酸的检测方法及设备

说明书

技术领域

本发明涉及一种适合中小医院和大医院的专科使用的同型半胱氨酸的检测方法、设备及试剂盒。

背景技术

上世纪六十年代末，McCully从病理上发现高胱氨酸尿症和胱硫醚尿症患者早期即可发生全身动脉粥样硬化和血栓形成，七十年代初他又通过动物模型证实同型半胱氨酸血中蓄积可导致类似血管损害。由于同型半胱氨酸检测技术的发展，对其研究逐渐深入，近年来的研究表明同型半胱氨酸可以作为判断心血管疾病危险性的独立危险因素，并认为与传统的指标相比，同型半胱氨酸具有更高的应用价值。

血浆中的同型半胱氨酸约70%与白蛋白结合，为结合型。其余的游离型则主要以二硫同型半胱氨酸和以二硫键结合的同型半胱氨酸-半胱氨酸化合物形式存在，只有少量以还原型同型半胱氨酸存在于血浆中，还原型仅占2%，我们通常所指的是总的同型半胱氨酸浓度。

现有同型半胱氨酸的检测方法：

目前，同型半胱氨酸最主要的两种检测方法是高效液相（HPLC）方法以及荧光偏振免疫检测（FPLA）方法，也有采用酶联免疫技术测定同型半胱氨酸的报道。

(1)高效液相色谱法(HPLC)

HPLC的基本分析原理：先使用还原剂使血样中所有形式的Hcy转变成还原形式，然后与荧光试剂进行衍生生成Hcy-荧光物质复合物，将衍生后的样品进行色谱分析。因色谱固定相对不同物质的吸附力不同，因此流动相将其洗脱下来的次序也不同，根据这一原理将样品中的不同物质分开，以荧光检测器检测洗脱下Hcy-荧光物质复合物的荧光强度，将其与标准品/内标的比值进行比较和计算，就可以测定血总Hcy的水平。

(2)荧光偏振免疫检测法（FPIA）

基本分析原理：样品中游离Hcy和抗单克隆抗体相结合的Hcy的荧光偏振强度不同，将样品、标准品与标抗体竞争结合，采用竞争结合的原理制作出hcy浓度与荧光偏振强度的标准曲线，在标准曲线上就可以查出其Hcy的浓度。FPIA法灵敏度高，检测速度快，但价格昂贵，故短时间期内不易普及。

(3)酶免疫分析法

基本分析原理：先使用酶将血样中所有形式的Hcy转变成s-腺苷-L-Hcy,然后加入酶标的抗s-腺苷-L-Hcy的单克隆或多克隆抗体，采用竞争结合的原理，将不同水平的标准品与酶标抗体竞争结合，然后以显色试剂和终止试剂分别进行显色和终止，制作出hcy浓度与发色强度的标准曲线。样品也按相同步骤处理，在标准曲线上就可以查出其Hcy的浓度。这是目前临床上测定同型半胱氨酸水平的常用方法，但是存在操作繁琐，检测耗时，偏差较大等缺点。

(4)毛细电泳法

基本分析原理：先使用还原剂使血样中所有形式的Hcy转变成还原形式，然后与荧光试剂进行衍生生成Hcy-荧光物质复合物，将衍生后的样品进行毛细电泳分析。将样品放置于10千伏左右的高压电场中，因为各种物质所带电荷不同，其等电点也不相同，因此其在电场中的迁移速度也就不同，根据这一原理可将Hcy与样品中的其它物质分开，再以荧光检测器检测Hcy-荧光物质复合物的荧光强度，将其与标准品/内标的比值进行比较和计算，就可以测定总Hcy的水平。

与传统的反相高效液相色谱相比，高效毛细血管电泳是近年来发展的一项高效分离、分析技术，主要用于实验研究，有在临床使用的报道。其缺点是与色谱方法相似，存在操作复杂、试验耗时较长和试验数据变异比较大。

(5)透射比色法

检测原理：使用酶转换法定量血浆中同型半胱氨酸的总浓度，不需要加入抗体进行反应。首先以还原剂将氧化态的同型半胱氨酸还原，再以基因重组酶将同型半胱氨酸分解。基因重组酶分解所形成之产物与适当呈色剂反应后之产物可于660nm波长下测定其OD值变化，该OD值变化与同型半胱氨酸浓度为线性关系。这是目前在临床检验领域中应用最为广泛的方法，但是透射比色法检测时光源和光电感应器在同一直线光路上，容易受到样品基质和其他物质的干扰，对检测灵敏度和检测数据的准确性都会产生影响。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种血液中同型半胱氨酸的检测方法与仪器，克服现有检测方法和产品的不足，能够快速、准确、方便的测定标本中同型半胱氨酸的浓度。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种同型半胱氨酸的检测方法，包括如下步骤：

（1）先在经过离心处理的血清样本中加入还原剂以将血清中的同型半胱氨酸还原；

（2）在从步骤（1）产生的混合物中加入基因重组酶将同型半胱氨酸分解；