[发明专利]一对特异识别绵羊KRT25基因的多肽及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了一对特异识别绵羊KRT25基因的多肽及其编码基因和应用。该多肽由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽乙由15个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸。本发明可实现在细胞或个体水平上对绵羊KRT25基因进行敲除或修饰，以解析绵羊KRT25基因的功能、构建绵羊KRT25基因突变库或获得相关疾病模型,为绵羊育种及医药研发服务。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一对特异识别绵羊KRT25基因的多肽及其编码基因和应用。

背景技术

角蛋白是毛囊和皮肤生物学功能重要的决定因子之一，在一定程度上决定羊毛的品质和产量。内根鞘角蛋白基因一般分为酸性的Ⅰ型角蛋白基因(KRT25，KRT26，KRT27，KRT28)和呈中性或碱性的Ⅱ型角蛋白基因(KRT71，KRT72，KRT73，KRT74)，它们都在毛囊内根鞘特异性表达。所编码的蛋白质参与毛囊的形态发生过程。Rogers(2004)研究证明Ⅰ型内根鞘角蛋白基因(Rogers GE.Hair follicle differentiation andregulation.International Journal of Developmental Biology,2004,48:163-170)在羊的内根鞘中特异性表达。由此可见，KRT25基因可作为绵羊抗病育种及羊毛细度育种的一个重要候选基因。在细胞或个体水平上对绵羊KRT25基因进行敲除或修饰，可解析绵羊KRT25基因的功能,为绵羊育种及医药研发服务。

转录激活子样效应因子核酸酶(transcription activator-like effectornucleases，TALENs)技术是一个高效的基因打靶新工具。转录因子激活效应物家族中有一种蛋白(TALEs)能够识别、结合DNA。TALE与DNA序列特异性结合主要是由TAL结构内34个恒定氨基酸序列介导。将TALEs与FokI核酸内切酶的切割域相连接，形成TALENs，从而可以实现对基因组DNA序列的精确修饰。TALENs是一种异源二聚体分子(两单位的TALE DNA结合结构域融合到一单位的催化性结构域)，能够切割两个相隔较近的序列，从而使得特异性增强。

发明内容

本发明的目的是提供一对特异识别绵羊KRT25基因的多肽及其编码基因和应用。本发明利用这对多肽构建获得的一对重组的转录激活子样效应因子(TALE)能够特异性地识别绵羊KRT25基因。本发明还利用这对转录激活子样效应因子构建获得的一对转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)，能够对绵羊KRT25基因进行准确、高效地靶向修饰。

具体地，本发明的目的是这样实现的：

一对特异识别绵羊KRT25基因的多肽(命名为特异多肽对)，由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽乙由15个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；

所述多肽甲中的16个双连氨基酸依次如下：序列表的序列3自N末端第12-13位氨基酸残基、第46-47位氨基酸残基、第80-81位氨基酸残基、第114-115位氨基酸残基、第148-149位氨基酸残基、第182-183位氨基酸残基、第216-217位氨基酸残基、第250-251位氨基酸残基、第284-285位氨基酸残基、第318-319位氨基酸残基、第352-353位氨基酸残基、第386-387位氨基酸残基、第420-421位氨基酸残基、第454-455位氨基酸残基、第488-489位氨基酸残基和第522-523位氨基酸残基。