[发明专利]一种养殖所用兽药或消毒剂进行实验室评价的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种养殖所用兽药或消毒剂的检测方法，尤其是一种养殖所用兽药或消毒剂进行实验室评价的方法。

背景技术

目前，采购市场兽药及消毒药前，可以通过微量药敏评价出高效或对于本养殖场有效药物，同时对疫情防治也能提供有效兽药。

发明内容

本发明的目的是提供一种养殖所用兽药或消毒剂进行实验室评价的方法。

这种养殖所用兽药或消毒剂进行实验室评价的方法：

①上样菌液制备：

将水样中分离大肠杆菌，挑取单个菌落混于5mL的TSB中，37℃烘箱静置孵育2h，此时菌液混浊，取100μL菌液10倍稀释8-10个梯度，均匀涂于TSA中37℃静置24h后计数，然后根据计数的菌液浓度调至105CFU/mL，用于上样菌液；

②不同浓度消毒剂制备：

根据消毒剂上使用说明的最低使用浓度和最高使用浓度，倍比稀释实验用浓度需包含最低和最高使用浓度，分为6个梯度；

③上样孵育：

(1)将96微孔板中第1排前6孔分别加入6种不同浓度消毒剂100μL，第7孔加入上样菌液200μL作为阳性对照，第8孔加入该消毒剂200μL；

(2)第1排前6孔再加入100μL上样菌液，致使每孔最终体系为200μL；

(3)第2排作为第1排消毒剂的平行对照，其他消毒剂也同上述方式加样后，盖好板盖；然后置于37℃，静置孵育，分别于3-6h和12-24h各取4个点观察MIC及测定OD450值；

④结果判定：

(1)MIC最小抑菌浓度比较：消毒剂的MIC与其使用说明中推荐浓度或最低使用浓度比较，若低于推荐浓度，则消毒剂效果较好，反之则较差；不同消毒剂MIC比较，MIC越低，但必须先小于推荐浓度，消毒剂效果越好；

(2)OD450抑菌趋势比较：对于MIC值相同消毒剂，可以通过OD450抑菌趋势，分析其抑菌作用时间及稳定性，判定优劣；

(3)有效抑菌浓度费用比较：根据有效抑菌浓度(MIC)，比较各消毒剂稀释同样水量，所花费的费用；

最后，结合MIC和OD450抑菌趋势及有效抑菌浓度费用综合评比，选出最优消毒剂。

发明的有益效果：

该发明采用微量药敏试验对于养殖场防治疾病所用兽药或消毒剂进行实验室评价，为正确使用药物提供一定参考依据。

具体实施方式

实施例：

1、上样菌液制备

将水样中分离大肠杆菌，挑取单个菌落混于5mL的TSB中，37℃烘箱静置孵育2h(此时菌液混浊)，取100μL菌液10倍稀释8-10个梯度，均匀涂于TSA中37℃静置24h后计数，然后根据计数的菌液浓度调至105CFU/mL，用于上样菌液。

2、不同浓度消毒剂制备

根据消毒剂上使用说明的最低使用浓度和最高使用浓度，倍比稀释实验用浓度需包含最低和最高使用浓度(一般6个梯度)。

3、上样孵育

(1)将96微孔板中第1排前6孔分别加入6种不同浓度消毒剂100μL，第7孔加入上样菌液200μL作为阳性对照，第8孔加入该消毒剂200μL。

(2)第1排前6孔再加入100μL上样菌液，致使每孔最终体系为200μL。

(3)第2排作为第1排消毒剂的平行对照，其他消毒剂也同上述方式加样后，盖好板盖。然后置于37℃，静置孵育，分别于3-6h和12-24h各取4个点观察MIC及测定OD450值。

4、结果判定：

(1)MIC(最小抑菌浓度)比较：消毒剂的MIC与其使用说明中推荐浓度(或最低使用浓度)比较，若低于推荐浓度，则消毒剂效果较好，反之则较差；不同消毒剂MIC比较，MIC越低(但必须先小于推荐浓度)，消毒剂效果越好。

(2)OD450抑菌趋势比较：对于MIC值相同消毒剂，可以通过OD450抑菌趋势，分析其抑菌作用时间及稳定性，判定优劣。

(3)有效抑菌浓度费用比较：根据有效抑菌浓度(MIC)，比较各消毒剂稀释同样水量，所花费的费用。

最后，结合MIC和OD450抑菌趋势及有效抑菌浓度费用综合评比，选出最优消毒剂。