[发明专利]胃蛋白酶原II（PGII）定量测定试剂盒及其制备方法与检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗器械生物类免疫体外诊断领域，主要涉及一种基于磁微粒分离化学发光法定量检测血液中胃蛋白酶原II(PGII)的试剂盒及其制备方法，以及应用该试剂盒定量检测血液中胃蛋白酶原II(PGII)的方法。

背景技术

胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体，根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群，1-5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原II，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原II。

通常情况下，约有1％的PG透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，进入血液循环的PG在血液中非常稳定；血清PGI和PGII反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能；当胃黏膜发生病理变化时，血清PG含量也随之改变；因此，监测血清中PG的浓度可以作为监测胃黏膜状态的手段。

血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能：PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多PGI升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低；PGII与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此，联合测定PGI和PGII比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。

在国内，胃蛋白酶原II(PGII)检测临床上主要以国外进口试剂和免疫组化试剂应用为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及。具有自主知识产权的国产胃蛋白酶原II(PGII)免疫化学发光检测试剂盒目前还较少，也仅停留在96孔微孔板式技术水平上。该技术灵敏度较低、线性窄、特异性较差，也不利于高通量的全自动检测。

因此，有待开发对胃蛋白酶原II(PGII)检测灵敏度高与可靠性并能降低检测成本的检测技术。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种新的可定量检测胃蛋白酶原II(PGII)的试剂盒，提高检测灵敏度及可靠性，并降低成本，延长有效期。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一方面，本发明提供了一种胃蛋白酶原II(PGII)定量测定试剂盒，该试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物。

其中：

一、胃蛋白酶原II(PGII)校准品、胃蛋白酶原II(PGII)质控品的配制方法如下：

用标准品缓冲液溶解胃蛋白酶原II(PGII)，配置胃蛋白酶原II(PGII)校准品、胃蛋白酶原II(PGII)校准品，其中，所述校准品缓冲液是通过在1L新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四环素和0.1g～0.5g硫酸新霉素，溶解后经过0.22μm滤膜处理制备；

二、抗试剂的制备方法如下：

(1)、抗试剂缓冲液的制备：

Tris：12.12mg～60.57mg，四环素：0.01g～0.05g，绵羊血清：1g～5g，新生牛血清3g～10g，马血清1g～5g加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解；

(2)、异硫氰酸荧光素与胃蛋白酶原II(PGII)的偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的胃蛋白酶原II(PGII)包被抗体：

首先用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，使用分光光度计在495nm处读取吸光值，来调整浓度，然后按照胃蛋白酶原II(PGII)抗体与异硫氰酸荧光素的质量之比为1:1.1，将二者同时转移到棕色玻璃瓶中，室温下搅拌1～2小时，充分反应后使用pH＝8～9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡，然后凝胶层析分离纯化得到的异硫氰酸荧光素标记的胃蛋白酶原II(PGII)包被抗体；紫外监测，记录仪记录纯化图谱，同时注意确认含有连接物的试管，注意、避光防护。

(3)、碱性磷酸酶与胃蛋白酶原II(PGII)抗体的偶联，获得碱性磷酸酶标记的胃蛋白酶原II(PGII)标记抗体：