[发明专利]一种载脂蛋白E检测试剂盒

说明书

  

技术领域

本发明涉及一种人体生物蛋白检测技术，特别是一种载脂蛋白E检测试剂盒。 

本申请中下列表达式的意义为： 

0.2M 磷酸二氢钠：表示溶液中磷酸二氢钠浓度为0.2mol/L；

0.1% NaN₃：表示每100mL溶液中加NaN₃0.1g；

ApoE抗体10—50%（v/v)：试剂R2中ApoE抗体添加量占试剂R2总体积的10—50%，以ml/ml计；

BSA：牛血清白蛋白；

EDTA：乙二胺四乙酸；

PBS：磷酸盐；

本申请中跟上述表达式类似之处，所表达意义均跟上述意义类似；本申请中类似表达式另有说明的除外。

  

背景技术

载脂蛋白E（ApoE）是一个含有299个氨基酸结合有磷脂的糖蛋白。其分子量为34kD。ApoE可以在各种组织中合成，但肝脏为主，首先合成的是含有317个氨基酸的前肽，这个前肽在内质网中经过蛋白水解作用除去18个氨基酸的信号肽，再经过糖基化作用和细胞外液的脱唾液酸形成成熟的ApoE；ApoE分泌入血液后转移到脂蛋白中。ApoE是脂蛋白所必须的结构蛋白，可通过与各组织细胞的受体结合，参与脂蛋白代谢，调节胆固醇水平，激活卵磷脂腿固醇脂舫蘸转移酶（LCAT），并具有某种免疫调节作用。测定ApoE对诊断和治疗高脂血症动脉粥样硬化等疾病提供了重要理论依据。载脂蛋白E主要存在于CM、VLDL、IDL和部分HDL中，正常人血浆ApoE浓度为0.03～0.05g/L。Apo E的浓度与血浆甘油三酯含量呈正相关。 

已知测定ApoE的方法有层析法、电泳法、免疫分析法、其中层析法和电泳法操作繁琐，不能进行批量样本分析和直接上全自动生化分析仪等缺点，而免疫分析法中的免疫扩散法、放射免疫分析法、荧光标记免疫分析法、酶标记免疫分析法、化学发光免疫分析法也存在诸多不足之处；如需特殊的设备，样品需处理，不能上全自动生化分析仪进行批量监测分析等。临床常用的免疫比浊法因其样本用量少，可直接在全自动生化分析仪上批量样本分析、操作简单受其欢迎；但目前建立的方法及试剂都存在一些缺点和不足，主要表现在：一是抗体效价不高，特异性、亲合力、亲和力不好；二是校准血清是以人血清为基，虽然乙肝表面抗原阴性、HIV检测阴性、丙氨酸氨基转移酶正常的人血清，但这也很难排除没有其他传染病的可能，给操作者带来不很大的危险性；而且校准血清为冻干品，每批的定值不一，使用前需用水复溶，操作极其不方便；另外，复溶后必须冰冻保存，特别是不能反复解冻使用，不但造成试剂浪费，而且质量得不到保证，测定结果差异大，其稳定性也不好；三是对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差；四是采用单点校准液定标，不符合曲线回归方程计算，导致出现高值偏低，低值偏高的现象，所测结果不准确；五是抗血清在短时间内出现沉淀，使上机操作困难，影响检测效果。 

  

发明内容

为解决上述问题，本发明公开了一种载脂蛋白E检测试剂盒，应用方便，试剂稳定性好，检测结果准确性好，使用方便，成本低廉，便于推广应用。 

    本发明公开的载脂蛋白E检测试剂盒，载脂蛋白E检测试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品， 

试剂R1的主要组成为：磷酸缓冲液    10—50mmol/L；聚乙二醇    10—40g/L；氯化钠       50—200mmol/L；吐温20      0.02—0.2%；BSA       0.1—1%；NaN₃               0.1%；所述聚乙二醇为低聚聚乙二醇；优选地试剂R1酸碱度为PH=7-8；

试剂R2的主要组成为：磷酸缓冲液     10—50mmol/L；氯化钠      50—200mmol/L；吐温20      0.02—0.2%；ApoE抗体    10—50%（v/v)；NaN₃        0.1%；优选地试剂R1酸碱度为PH=7-8；

校准品的主要组成为：磷酸缓冲液    10—50mmol/L；氯化钠       50—200mmol/L；BSA       0.1—1%；EDTA      0.2-5mmol/L；吐温20       0.02—0.2%；NaN₃       0.1%；ApoE抗原     0—120mg/L，优选地试剂R1酸碱度为PH=7-8。

    作为一种优选，试剂R1中聚乙二醇的数均分子量为6000。