[发明专利]一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种缺血修饰白蛋白检测技术领域，尤其涉及一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒。

背景技术

缺血修饰白蛋白(IMA)是一种新的较为理想的缺血标志物，它是在缺血或再灌注发生时，由于自由基等破坏了血清白蛋白的氨基酸序列，而导致白蛋白与过渡金属的结合能力改变，从而发生与过渡金属结合能力改变的白蛋白。

作为检测早期心肌缺血的指标，IMA可敏感地反映心肌缺血状况，因此，在急性冠状动脉综合征的早期诊断、危险分层、指导治疗等方面有着重要意义。目前，国内外普遍采用的检测IMA试剂盒由液体双试剂组成，第一试剂为钴离子试剂，第二试剂为二硫苏糖醇(DTT)试剂。但是由于DTT本身是一种很强的还原剂，很容易被空气氧化，而且半衰期液比较短，因此稳定性很差。为了提高试剂的稳定性，中国发明专利(公开号：CN102507916A)通过将DTT加入到高浓度缓冲液中，并加入少量非离子型表面活性剂，从而大大降低了DTT氧化的速度，提高了试剂的稳定性。又如中国发明专利(公开号：CN103760357A)通过在试剂2(DTT试剂)中加入还原保护剂谷胱甘肽、亚硫酸氢钠或巯基乙醇，有效地保护了DTT在溶液中的稳定性。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种可以快速达到反应终点，性能稳定，室温开瓶避光保存稳定30天，2-8℃闭瓶保存稳定12个月，完全满足临床检验需要的稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒，包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂，

所述钴离子试剂的组分为：缓冲液：50-500mmol/L，氯化钴：0.01-1.0g/L，表面活性剂：1g/L，防腐剂：0.5g/L；

所述二硫苏糖醇试剂的组分为：缓冲液：50-300mmol/L，DTT：0.01-1.0g/L，表面活性剂：1g/L，保护剂：1-20g/L，防腐剂：0.5g/L。

在上述的一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒中，所述钴离子试剂中的缓冲液可以是三羟甲基氨基甲烷缓冲液、哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液或三乙醇胺缓冲液中的一种。

在上述的一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒中，所述钴离子试剂中的缓冲液的pH为7.0-8.5。

在上述的一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒中，所述二硫苏糖醇试剂中的缓冲液可以是醋酸-醋酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或2-吗啉乙磺酸缓冲液中的一种。

在上述的一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒中，所述二硫苏糖醇试剂中的缓冲液的pH为5.0-6.5。

在上述的一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒中，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂中的表面活性剂可以是TritonX-100、吐温-20或布里杰-35中的一种。表面活性剂可以加速反应达到终点。

在上述的一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒中，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂中的防腐剂可以是叠氮钠或proclin系列中的一种。

在上述的一种稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒中，所述二硫苏糖醇试剂中的保护剂可以是甘露醇、葡萄糖或甘油中的一种。上述保护剂保护剂甘露醇、葡萄糖和甘油可以大幅度减缓DTT的氧化速率，显著提高试剂的稳定性。

本发明稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒检测原理是：血清中正常的白蛋白以活性形式存在，当加入钴离子试剂后，Co²⁺与白蛋白N-末端结合，溶液中存在的游离Co²⁺浓度较低。而心肌缺血患者血清标本中含有较多的IMA，加入同等量的钴离子试剂后，由于IMA与Co²⁺的结合能力降低，溶液中存在较高浓度的游离Co²⁺，加入二巯基苏糖醇试剂后，二巯基苏糖醇试剂可与游离Co²⁺产生络合反应，生成红褐色的产物，在最大吸收波长下测定吸光度的大小，其吸光度与Co²⁺浓度成正比，吸光度高者表示血清中存在较多的IMA。与标准品进行比较，即可计算出样本中IMA的浓度。

与现有技术相比，本发明具有以下几个优点：

1.本发明稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒能快速达到反应终点、测试性能稳定。

2.本发明稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒中加入保护剂，明显的提高了试剂的稳定性，室温开瓶避光保存稳定30天，2-8℃闭瓶保存稳定12个月，完全满足临床检验的需要。

附图说明

图1为本发明稳定的缺血修饰白蛋白试剂盒的定标曲线；